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[摘要]目的：对不同生产厂家生产的小儿咳喘灵颗粒中所含有的金银花质量进行检验。方法：在对金银花进行定性鉴定的过程中，主要采用的是薄层色谱法，在对金银花的绿原酸含量进行检验的过程中，主要采用HPLC法进行检定，对于灰毡毛忍冬皂苷乙进行含有量检定的过程中，采用的方法是HPLC-ELSD法。结果：本文主要选择了26个药厂生产的小儿咳喘灵颗粒，在这26个批次的产品中，主要有12个批次的产品中含有灰毡毛忍冬皂苷乙，由此可以推断原料中有金银花的存在。结论：通过对小儿咳喘灵颗粒进行检测可以发现有绿原酸以及灰毡毛忍冬皂苷乙的存在，能够有效的帮助对金银花进行质量控制。
[关键词]小儿咳喘灵颗粒；金银花；绿原酸；灰毡毛忍冬皂苷乙
[中图分类号]R246.4 [文献标识码]A [文章编号]1672-5018（2016）12-029-02
在小儿咳喘灵颗粒中，主要的原料有金银花、麻黄以及甘草等七味药材，主要的作用是止咳，能够治疗肺炎以及支气管炎等，其最主要的特点就是副作用小，并且并没有不良反应现象的出现，在当前的生产企业中，大约有一百多家的企业生产小儿咳喘灵颗粒，但是在质量检测方面却存在一定的难度，不能有效的对质量进行检测，并且在不同的检测项目上具有不同的标准，通常情况下金银花具有抗菌作用，其抗菌成分为绿原酸以及异绿原酸，而判定金银花质量主要是以绿原酸为基础的，因此本文重点对金银花质量进行检定，希望能够促进质量标准的进一步提高。
1、仪器与试药
1.1仪器
MettlerXSl05DU电子天平；Wme～e2695高效液相色谱仪，包括XbridgeCt8色谱柱、Waters2489紫外检测器；Agilenl200高效液相色谱仪，包括KromasilC18色谱柱、Varian380-LC蒸发光散射检测器。
1.2试药
选取适量的金银花以及绿原酸为对照品，纯度为92.8%的灰毡毛忍冬皂苷乙为对照品，对其含有量进行检测，色谱纯为甲醇与乙腈，分析纯为乙酸丁酯、醋酸、甲酸、磷酸。水为超纯水。小儿咳喘灵颗粒共26批样品，均为山东省17地市市售品种，来自26个不同生产企业。
2、方法与结果
2.1薄层色谱鉴别
26批样品各取2g，研细，加甲醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取金银花对照药材0.2g，加甲醇5mL，超声处理30min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL、对照品溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯一甲酸一水（7：2.5：2.5）的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
2.2绿原酸成分测定
C18色谱柱f250ram×4.6mm×5μm）；流动相为乙腈-4溶液（用磷酸调pH至3.0，15：85）；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测波长327nm；进样量20p.L。
对照品溶液的制备。精密称取绿原酸对照品9.92mg（纯度96.6%），置100mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含95.83μg的贮备液（10℃以下保存）。供试品溶液的制备。取本品适量，研细，精密称取约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定质量，超声处理（功率300W、频率40kHz）30min，放冷，再称定质量，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液lmL，置10mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性关系与检出限。精密量取绿原酸对照品贮备液1mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μL，在色谱条件下依次进样。以峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=2898949X一6996，r=1.0000，线性范围为0.0038～0.1917μg。按信噪比3：1计，检出限为1.86ng。
精密度试验。精密吸取同一对照品溶液10μL，在色谱条件下，连续进样6次，记录峰面积。计算RSD为0.87%，表明仪器精密度良好。
重复性试验。取同一批次样品6份，制备供试品溶液，在色谱条件下进样，测定绿原酸峰面积。结果RSD值为2.1%。
稳定性试验。取同一供试品溶液，分别在制备后0、2、4、8、12、24h进行测定。结果绿原酸峰面积的RSD值为0.92%，表明样品溶液在24h内稳定。
加样回收率试验。精密称取含有量已知的样品0.5g共6份，分别加入相同量的质量浓度为0.2124mg/mL的对照品溶液。制备供试品溶液，在色谱条件下進样，结果见表1。
样品测定。取26批小儿咳喘灵颗粒样品，精密称定制备供试品溶液，在色谱条件下进行测定，计算，结果见表2。
2.3灰毡毛忍冬皂苷乙成分测定
色谱条件AgilentC，s色谱柱（250mm×4.6mm×5μm）；流动相为乙腈0.4%醋酸溶液，梯度洗脱（0～10min，11.5%～15%乙腈；10～12min，15%～29%乙腈；12～18min，29%～33%乙腈；18～30min，33%～45%乙腈）；载气体积流量1.6mL/min；柱温30℃；蒸发光散射检测器检测；雾化器温度35℃；蒸发器40℃。
溶液的制备。对照品溶液的制备。取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lmL含灰毡毛忍冬皂苷乙0.6mg的溶液。供试品溶液的制备。精密称取本品粉末（过四号筛）约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定质量，超声处理（功率300W，频率40kHz）40min，放冷，再称定质量，50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。样品测定。取26批小儿咳喘灵颗粒样品，精密称定，制备供试品溶液，在色谱条件下进行测定，计算，结果见表2。
3、讨论
本文采用的检测方法为薄层色谱方法，这种方法能够有效的对小儿咳喘灵颗粒中所含有的金银花质量进行检验，在26个批次的样品检验过程中，其中有23个批次出现主斑点，有4个批次的主斑点并不十分明显。由此可见，这四个生产厂家在金银花的投料方面存在一定的问题。山银花中也含有绿原酸，这与金银花的构成是相似的，所以在22个批次的样品中都检验出含有绿原酸的存在，这就无法有效的分辨到底是山银花还是金银花，所以薄层色谱法具有一定的局限性。在此基础上，又对乙酸乙酯、丙酮以及甲酸、水之间的比例进行判断，以此作为展开剂，并且采用含有1%的三氯化铁溶液以及1%的铁氰化钾溶液进行混合使用，将其当作显色剂，这样的实验方法更加便捷，采用这种方法以后能够更加清楚的显现出绿原酸斑点。
在对小儿咳喘灵颗粒的26个批次产品进行检验的过程中，采用HPLC的方法对金银花中的绿原酸含量进行考察，绿原酸自身具有不稳定的特点，并且见到光以后就十分容易分解，所以在实验中应该对瓶子的颜色进行区分，以棕色瓶为宜，并且需要在避光的环境下进行操作，在对检测结果进行确定的过程中，不同的企业具有较大的差异，因此可以推断药材具有较大的质量差异，而且有些企业在金银花投料的过程中也没有按照规定进行，所得出的结果与金银花薄层色谱得到的结果是相一致的。
在当前对小儿咳喘灵颗粒进行质量检测的过程中具有不同的标准，但是很多企业具有较低的质量标准，所以时无法对药物质量进行有效控制的。当前国家药监局在试行标准中也是不尽相同的，在项目检查以及限度方面也具有一定的差异性，所以对小儿咳喘灵颗粒的质量是无法得到有效控制的。在检验的过程中，应该对金银花以及山银花进行合理的区分，因为其来源以及成分都是不相同的，但是在实际应用的过程中还存在一定的差异性，所以只有促进质量标准水平的提高，才能保证小儿咳喘灵颗粒更加安全。
[关键词]小儿咳喘灵颗粒；金银花；绿原酸；灰毡毛忍冬皂苷乙
[中图分类号]R246.4 [文献标识码]A [文章编号]1672-5018（2016）12-029-02
在小儿咳喘灵颗粒中，主要的原料有金银花、麻黄以及甘草等七味药材，主要的作用是止咳，能够治疗肺炎以及支气管炎等，其最主要的特点就是副作用小，并且并没有不良反应现象的出现，在当前的生产企业中，大约有一百多家的企业生产小儿咳喘灵颗粒，但是在质量检测方面却存在一定的难度，不能有效的对质量进行检测，并且在不同的检测项目上具有不同的标准，通常情况下金银花具有抗菌作用，其抗菌成分为绿原酸以及异绿原酸，而判定金银花质量主要是以绿原酸为基础的，因此本文重点对金银花质量进行检定，希望能够促进质量标准的进一步提高。
1、仪器与试药
1.1仪器
MettlerXSl05DU电子天平；Wme～e2695高效液相色谱仪，包括XbridgeCt8色谱柱、Waters2489紫外检测器；Agilenl200高效液相色谱仪，包括KromasilC18色谱柱、Varian380-LC蒸发光散射检测器。
1.2试药
选取适量的金银花以及绿原酸为对照品，纯度为92.8%的灰毡毛忍冬皂苷乙为对照品，对其含有量进行检测，色谱纯为甲醇与乙腈，分析纯为乙酸丁酯、醋酸、甲酸、磷酸。水为超纯水。小儿咳喘灵颗粒共26批样品，均为山东省17地市市售品种，来自26个不同生产企业。
2、方法与结果
2.1薄层色谱鉴别
26批样品各取2g，研细，加甲醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取金银花对照药材0.2g，加甲醇5mL，超声处理30min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL、对照品溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯一甲酸一水（7：2.5：2.5）的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
2.2绿原酸成分测定
C18色谱柱f250ram×4.6mm×5μm）；流动相为乙腈-4溶液（用磷酸调pH至3.0，15：85）；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测波长327nm；进样量20p.L。
对照品溶液的制备。精密称取绿原酸对照品9.92mg（纯度96.6%），置100mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含95.83μg的贮备液（10℃以下保存）。供试品溶液的制备。取本品适量，研细，精密称取约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定质量，超声处理（功率300W、频率40kHz）30min，放冷，再称定质量，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液lmL，置10mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性关系与检出限。精密量取绿原酸对照品贮备液1mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μL，在色谱条件下依次进样。以峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=2898949X一6996，r=1.0000，线性范围为0.0038～0.1917μg。按信噪比3：1计，检出限为1.86ng。
精密度试验。精密吸取同一对照品溶液10μL，在色谱条件下，连续进样6次，记录峰面积。计算RSD为0.87%，表明仪器精密度良好。
重复性试验。取同一批次样品6份，制备供试品溶液，在色谱条件下进样，测定绿原酸峰面积。结果RSD值为2.1%。
稳定性试验。取同一供试品溶液，分别在制备后0、2、4、8、12、24h进行测定。结果绿原酸峰面积的RSD值为0.92%，表明样品溶液在24h内稳定。
加样回收率试验。精密称取含有量已知的样品0.5g共6份，分别加入相同量的质量浓度为0.2124mg/mL的对照品溶液。制备供试品溶液，在色谱条件下進样，结果见表1。
样品测定。取26批小儿咳喘灵颗粒样品，精密称定制备供试品溶液，在色谱条件下进行测定，计算，结果见表2。
2.3灰毡毛忍冬皂苷乙成分测定
色谱条件AgilentC，s色谱柱（250mm×4.6mm×5μm）；流动相为乙腈0.4%醋酸溶液，梯度洗脱（0～10min，11.5%～15%乙腈；10～12min，15%～29%乙腈；12～18min，29%～33%乙腈；18～30min，33%～45%乙腈）；载气体积流量1.6mL/min；柱温30℃；蒸发光散射检测器检测；雾化器温度35℃；蒸发器40℃。
溶液的制备。对照品溶液的制备。取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lmL含灰毡毛忍冬皂苷乙0.6mg的溶液。供试品溶液的制备。精密称取本品粉末（过四号筛）约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定质量，超声处理（功率300W，频率40kHz）40min，放冷，再称定质量，50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。样品测定。取26批小儿咳喘灵颗粒样品，精密称定，制备供试品溶液，在色谱条件下进行测定，计算，结果见表2。
3、讨论
本文采用的检测方法为薄层色谱方法，这种方法能够有效的对小儿咳喘灵颗粒中所含有的金银花质量进行检验，在26个批次的样品检验过程中，其中有23个批次出现主斑点，有4个批次的主斑点并不十分明显。由此可见，这四个生产厂家在金银花的投料方面存在一定的问题。山银花中也含有绿原酸，这与金银花的构成是相似的，所以在22个批次的样品中都检验出含有绿原酸的存在，这就无法有效的分辨到底是山银花还是金银花，所以薄层色谱法具有一定的局限性。在此基础上，又对乙酸乙酯、丙酮以及甲酸、水之间的比例进行判断，以此作为展开剂，并且采用含有1%的三氯化铁溶液以及1%的铁氰化钾溶液进行混合使用，将其当作显色剂，这样的实验方法更加便捷，采用这种方法以后能够更加清楚的显现出绿原酸斑点。
在对小儿咳喘灵颗粒的26个批次产品进行检验的过程中，采用HPLC的方法对金银花中的绿原酸含量进行考察，绿原酸自身具有不稳定的特点，并且见到光以后就十分容易分解，所以在实验中应该对瓶子的颜色进行区分，以棕色瓶为宜，并且需要在避光的环境下进行操作，在对检测结果进行确定的过程中，不同的企业具有较大的差异，因此可以推断药材具有较大的质量差异，而且有些企业在金银花投料的过程中也没有按照规定进行，所得出的结果与金银花薄层色谱得到的结果是相一致的。
在当前对小儿咳喘灵颗粒进行质量检测的过程中具有不同的标准，但是很多企业具有较低的质量标准，所以时无法对药物质量进行有效控制的。当前国家药监局在试行标准中也是不尽相同的，在项目检查以及限度方面也具有一定的差异性，所以对小儿咳喘灵颗粒的质量是无法得到有效控制的。在检验的过程中，应该对金银花以及山银花进行合理的区分，因为其来源以及成分都是不相同的，但是在实际应用的过程中还存在一定的差异性，所以只有促进质量标准水平的提高，才能保证小儿咳喘灵颗粒更加安全。