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应用番鸭胚成纤维细胞和鸡胚成纤维细胞（CEF）交替传代选育出适应CEF繁殖的番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗株。该弱毒株已失去对1日龄雏番鸭的致病性，对CEF的TCIDs。稳定在10^-5～10^-5.5；在雏番鸭体内连续盲传5代，未见毒力返强现象；1日龄雏番鸭免疫不同代次弱毒后7d攻击番鸭呼肠孤病毒强毒，保护率均在88％以上，且不同代次弱毒的外源病毒检验结果均为阴性。上述结果表明该弱毒株无外源病毒污染、安全性好、遗传性稳定、免疫原性强，可用于制备番鸭呼肠孤病毒病活疫苗。