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【摘要】目的：观察六君疏肝汤对反流性食管炎大鼠模型食管增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：采用“不全幽门结扎+贲门肌切开术”制作动物模型，36只大鼠分为正常组、模型组、治疗组。给予相应处理后，取食管组织行HE染色，光镜下观察组织病变学变化，用免疫组化的方法测PCNA表达。结果:六君疏肝汤能显著改变反流性食管炎的病理变化，能显著抑制PCNA表达的升高，与模型组相比PCNA的表达显著降低。结论：六君疏肝汤有助于降低PCNA的高表达，并有抗胃食管反流，减轻食管炎症的疗效。
【关键词】六君疏肝汤；反流性食管炎；增殖细胞核抗原
【中图分类号】R571【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0051-01
1材料和方法
1.1材料健康♀SD大鼠36只，体重200-260g，由河北医科大学实验动物中心提供。六君疏肝汤由人参、白术、茯苓、炙甘草、陈皮、半夏、香附、砂仁、苏梗、木香组成。本院制剂中心制备，水煎后浓缩配置，配成430g/L的浓度；治疗组为人等效剂量的四倍。PCNA试剂：兔抗鼠PCNA多克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒为武汉博士德生物有限公司提供。
1.2方法
1.2.1造模造模前大鼠适应环境7d，术前禁食24h，按30mg/kg，ip10g/L戎巴比妥钠溶液进行麻醉。将大鼠固定于鼠板，取上腹部正中切开进腹，分离贲门及胃，缝合血管，纵行切开贲门肌0.5cm至黏膜层，而后分离幽门，半结扎幽门。关腹前腹腔注入生理盐水1ml及庆大霉素2万IU，术后禁食24h，不禁水。观察大鼠饮食、粪便及活动情况，每周测定体质量，术后三周即造模完成。
1.2.2分组给药预留12只作为正常组，其余大鼠按照以上方法进行造模，造模完成后将大鼠随机分为：模型组、治疗组。正常组不治疗，其他两组分别给予生理盐水、中药灌胃，10Ml/kg，每天一次，连续给药4周。
1.2.3取食管组织末次给药24h后，断髓处死大鼠，取下食管组织，纵行剖开，作大体形态观察，观察完后将标本放入40g/L甲醛固定后常规HE染色，采用ABC法，观察结果。PCNA：阳性着色定位于细胞核，细胞核被染成棕黄色或褐色，呈颗粒型或弥漫型。食管上皮组织均出现不同程度的细胞PCNA免疫组化阳性反应，免疫阳性细胞主要位于基底细胞层的第1-2层和乳突区基底细胞。计算方法：每个高倍视野计算阳性细胞，然后计算出单位面积的阳性细胞数，任选12个视野。
1.2.4统计学处理计量资料以±s表示，用SPSS11.0统计软件进行分析，采用t检验。
2结果
2.1大体标本观察从反流性食道炎造模后取材病理观察，模型组主要表现为食管黏膜发红、糜烂或溃疡；治疗组与模型组有明显的病理学改变。证实反流性食管炎造模成功。
2.2免疫组化结果PCNA在造模组、中药治疗组的表达与正常组差异显著，见表1。
3讨论
反流性食管炎是因胃内容物反流进入食管而引起食管黏膜炎症。食管粘膜在刺激物的作用下，增生细胞不断分化、增值并随着炎症的加重，表达率也逐渐的增加。在细胞的异常增生或不典型增生和肠化生中，PCNA发挥着重要作用。因此，PCNA的阳性表达在反流性食管炎中具有重要的作用，根据临床表现反流性食管炎多属于中医学“反胃”、“嘈杂”、“泛酸”、“胃痛”等范畴。在病因病机方面，多数学者认为本病是由于各种因素造成气机升降失常，胃气上逆所致。老年反流性食管炎我们在长期的临床实践中认识到病机主要为脾虚肝郁，胆失于疏泄，脾胃升降失调，胃气上逆所致；因此，我们根据健脾疏肝的治疗原则组方，治宜健脾理气，和胃降逆。六君疏肝汤中香附、砂仁理气降逆和胃，陈皮、半夏健脾和胃、人参、白术、茯苓、甘草益气健脾固本，干姜温胃和中。全方共奏健脾益气、温中行气之效，以改善食管运动功能障碍，故疗效满意。现代药理研究表明，人参主要成分对实验性溃疡有防治作用，半夏、茯苓具有显著的抑制胃液分泌的作用，白术、甘草能调节胃肠运动、抗溃疡、增加免疫功能。六君疏肝汤有助于降低PCNA的高表达，并有抗胃食管反流，减轻食管炎症的疗效。具有明显减轻食管炎症，降低PCNA的高表达，抑制细胞的异常增生或不典型增生和肠化的作用。
参考文献
[1]陈欣童，黄晓军，陈威.中西医联合用药治疗反流性食管炎疗效观察[J].现代预防医学,2006,33（2）：112
(收稿日期：2009.03.10)
【关键词】六君疏肝汤；反流性食管炎；增殖细胞核抗原
【中图分类号】R571【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0051-01
1材料和方法
1.1材料健康♀SD大鼠36只，体重200-260g，由河北医科大学实验动物中心提供。六君疏肝汤由人参、白术、茯苓、炙甘草、陈皮、半夏、香附、砂仁、苏梗、木香组成。本院制剂中心制备，水煎后浓缩配置，配成430g/L的浓度；治疗组为人等效剂量的四倍。PCNA试剂：兔抗鼠PCNA多克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒为武汉博士德生物有限公司提供。
1.2方法
1.2.1造模造模前大鼠适应环境7d，术前禁食24h，按30mg/kg，ip10g/L戎巴比妥钠溶液进行麻醉。将大鼠固定于鼠板，取上腹部正中切开进腹，分离贲门及胃，缝合血管，纵行切开贲门肌0.5cm至黏膜层，而后分离幽门，半结扎幽门。关腹前腹腔注入生理盐水1ml及庆大霉素2万IU，术后禁食24h，不禁水。观察大鼠饮食、粪便及活动情况，每周测定体质量，术后三周即造模完成。
1.2.2分组给药预留12只作为正常组，其余大鼠按照以上方法进行造模，造模完成后将大鼠随机分为：模型组、治疗组。正常组不治疗，其他两组分别给予生理盐水、中药灌胃，10Ml/kg，每天一次，连续给药4周。
1.2.3取食管组织末次给药24h后，断髓处死大鼠，取下食管组织，纵行剖开，作大体形态观察，观察完后将标本放入40g/L甲醛固定后常规HE染色，采用ABC法，观察结果。PCNA：阳性着色定位于细胞核，细胞核被染成棕黄色或褐色，呈颗粒型或弥漫型。食管上皮组织均出现不同程度的细胞PCNA免疫组化阳性反应，免疫阳性细胞主要位于基底细胞层的第1-2层和乳突区基底细胞。计算方法：每个高倍视野计算阳性细胞，然后计算出单位面积的阳性细胞数，任选12个视野。
1.2.4统计学处理计量资料以±s表示，用SPSS11.0统计软件进行分析，采用t检验。
2结果
2.1大体标本观察从反流性食道炎造模后取材病理观察，模型组主要表现为食管黏膜发红、糜烂或溃疡；治疗组与模型组有明显的病理学改变。证实反流性食管炎造模成功。
2.2免疫组化结果PCNA在造模组、中药治疗组的表达与正常组差异显著，见表1。
3讨论
反流性食管炎是因胃内容物反流进入食管而引起食管黏膜炎症。食管粘膜在刺激物的作用下，增生细胞不断分化、增值并随着炎症的加重，表达率也逐渐的增加。在细胞的异常增生或不典型增生和肠化生中，PCNA发挥着重要作用。因此，PCNA的阳性表达在反流性食管炎中具有重要的作用，根据临床表现反流性食管炎多属于中医学“反胃”、“嘈杂”、“泛酸”、“胃痛”等范畴。在病因病机方面，多数学者认为本病是由于各种因素造成气机升降失常，胃气上逆所致。老年反流性食管炎我们在长期的临床实践中认识到病机主要为脾虚肝郁，胆失于疏泄，脾胃升降失调，胃气上逆所致；因此，我们根据健脾疏肝的治疗原则组方，治宜健脾理气，和胃降逆。六君疏肝汤中香附、砂仁理气降逆和胃，陈皮、半夏健脾和胃、人参、白术、茯苓、甘草益气健脾固本，干姜温胃和中。全方共奏健脾益气、温中行气之效，以改善食管运动功能障碍，故疗效满意。现代药理研究表明，人参主要成分对实验性溃疡有防治作用，半夏、茯苓具有显著的抑制胃液分泌的作用，白术、甘草能调节胃肠运动、抗溃疡、增加免疫功能。六君疏肝汤有助于降低PCNA的高表达，并有抗胃食管反流，减轻食管炎症的疗效。具有明显减轻食管炎症，降低PCNA的高表达，抑制细胞的异常增生或不典型增生和肠化的作用。
参考文献
[1]陈欣童，黄晓军，陈威.中西医联合用药治疗反流性食管炎疗效观察[J].现代预防医学,2006,33（2）：112
(收稿日期：2009.03.10)