【摘 要】
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通过常规分子生物学方法,先将狂犬病毒糖蛋白(Rgp)基因从含有狂犬病毒SRV9株糖蛋白基因的pGT质粒克隆至pVAX1,再通过E3缺失穿梭质粒pVAX△E3,构建成pVAX△E3Rgp,然后再通过酶
【机 构】
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中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所;
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通过常规分子生物学方法,先将狂犬病毒糖蛋白(Rgp)基因从含有狂犬病毒SRV9株糖蛋白基因的pGT质粒克隆至pVAX1,再通过E3缺失穿梭质粒pVAX△E3,构建成pVAX△E3Rgp,然后再通过酶切连接将其克隆入犬2型腺病毒骨架质粒pPoly2-CAV2中,获得重组质粒pPoly2-CAV2-△E3-Rgp。最后再从pPoly2-CAV2-△E3-Rgp中释放E3缺失区域含有Rgp表达盒的重组犬2型腺病毒基因组CAV2-△E3-Rgp,转染DK细胞系,获得E3缺失区域含有Rgp表达盒的重组犬2型腺病毒CAV2-△E3-Rgp。该重组病毒能在DK细胞上产生典型的腺病毒细胞病变。通过酶切、PCR、基因测序,表明该重组病毒含有完整的Rgp表达盒。通过RT-PCR、Western-blot等检测,表明该重组病毒表达Rgp抗原。
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