【摘 要】
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本实验旨在筛选副溶血性弧菌物种特异性的检测靶点,进而结合环等温介导核酸扩增(LAMP)技术建立水产品中副溶血性弧菌的快速、有效检测方法。实验采用建立本地BLAST比对分析平台,比较基因组学分析副溶血性弧菌的基因组并筛选出物种特异的检测靶点,PCR进一步确认检测靶点,LAMP技术建立水产品中副溶血性弧菌的检测方法。结果表明,从NCBI网站下载目前已知细菌基因组数据,建立本地BLAST比对分析平台；将
【机 构】
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浙江工商大学食品与生物工程学院,浙江省食品与质量安全重点实验室 杭州 310035 浙江工商大学食
【出 处】
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中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛
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本实验旨在筛选副溶血性弧菌物种特异性的检测靶点,进而结合环等温介导核酸扩增(LAMP)技术建立水产品中副溶血性弧菌的快速、有效检测方法。实验采用建立本地BLAST比对分析平台,比较基因组学分析副溶血性弧菌的基因组并筛选出物种特异的检测靶点,PCR进一步确认检测靶点,LAMP技术建立水产品中副溶血性弧菌的检测方法。结果表明,从NCBI网站下载目前已知细菌基因组数据,建立本地BLAST比对分析平台；将副溶血性弧菌全基因组的氨基酸序列与已建立的数据库进行blastp比对,从中筛选出157个基因(e-value＜10-3&Length≥300bp),进而将这些基因在NCBI中进行blastp比对做进一步校正,筛选得到9个Identity值小于等于25％的基因；PCR结果显示VPA0913具有相对较高的灵敏度和较低的检测限；针对VPA0913基因设计用于LAMP扩增的引物,LAMP能特异性地扩增出51株副溶血性弧菌的目的产物,而非副溶血性弧菌中则无产物；应用建立的LAMP技术对杭州市13个农贸市场的117份水产品进行检测,阳性结果与国标法一致。通过实验,成功筛选出的VPA0913基因是针对副溶血性弧菌的物种特异性检测靶点,建立的LAMP技术能快速、有效地检测水产品中的副溶血性弧菌。
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