【摘 要】
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目的建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A群、C群、Y群、W135群)结合物中游离多糖含量的检测方法。方法根据脱氧胆酸钠(NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,对标准蛋白溶液
【机 构】
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天津科技大学; 天津康希诺生物技术有限公司;
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目的建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A群、C群、Y群、W135群)结合物中游离多糖含量的检测方法。方法根据脱氧胆酸钠(NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,对标准蛋白溶液进行酸沉淀处理,考察其蛋白沉淀效果;分别对脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A群、C群、Y群、W135群)结合物进行脱氧胆酸钠酸沉淀,检测其游离多糖含量;向脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,考察其准确度;向标准蛋白溶液中标加不同浓度的脱氧胆酸钠溶液,验证脱氧胆酸钠对于蛋白检测的干扰,考察其耐用性。结果不同浓度的标准蛋白溶液经脱氧胆酸钠酸沉淀法处理后,蛋白浓度在100~300μg/ml范围内,沉淀中蛋白回收率为90%~110%,蛋白浓度大于300μg/ml的样品时,回收率显著降低;分别对脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,上清中多糖回收率为80%~110%。重复6次对脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物进行游离多糖含量检测,其相对标准偏差(RSD)均低于15%;当溶液总中NaDC的浓度不高于2%时,对蛋白检测无干扰。结论 NaDC沉淀法能专一的沉淀蛋白,不沉淀多糖,该方法有较高的准确度和精密度,重复性好,可用于脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中游离多糖含量的测定。
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