前胰岛素原的无效转位对胰岛细胞功能衰竭的影响

来源 :中华医学会第十四次全国内分泌学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:suanqing
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目的 在前期研究基础上,探讨可导致迟发DM的突变前胰岛素原R6C和R6H的无效转位导致β细胞衰竭和DM的分子机制方法 1在有无MG132处理下,用35S-Met/Cys标记追踪转染R6C/A24D的293T,INSAb-IP,SDS-PAGE分析2设计恢复n/c区正电荷的双突变R6C-M5R和R6C-D20R转染293T细胞,用35SCys/Met标记,INSAb-IP,SDS-PAGE分析3应用荧光共聚焦显微镜显示未转位R6C的定位,并用mycAb检测表达WT/R6C的INS1细胞,通过激活Bip/HSE启动子驱动的荧光素酶活性评估ERS和HSE反应;建立可被DOX诱导的表达WT/R6C的β细胞系,以此为工具进行实验,将两种诱导细胞分别进行western-blot检测HSP70和BiP的表达,评估R6C对β细胞的损伤.3)应用DOX诱导克隆检测细胞生长,并应用BrdU和TUNEL法检测细胞增殖和凋亡.
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