目的构建基于pBlueBac4.5质粒的1.2倍基因组长度C基因型HBV重组体,并研究其在HepG2细胞中的表达和复制。方法以重组质粒pWT上的1.2倍基因组长度C基因型HBV DNA序列和pBB4.5HBV1.3（D基因型）上的pBlueBac4.5载体序列为模板,构建重组质粒pBB4.5HBV1.2（C基因型）。用FuGENE^?HD瞬时转染法,将pBB4.5HBV1.2导入HepG2细胞。用化学发光免疫分析法、Southern印迹杂交法、荧光定量PCR法,分别检测转染后不同时间点HBsAg和HBeAg、HBV复制中间体及HBV DNA水平。此外,对转染时重组质粒用量进行优化。结果酶切和序列分析证实,pBB4.5HBV1.2重组质粒构建成功。初步转染实验证实,在转染细胞培养上清中可检测到HBsAg和HBeAg。优化后转染条件是:使用60mm细胞培养皿,8～11μg pBB4.5HBV1.2,质粒与转染试剂5:9（μg:μl）。在此条件下,5天实验周期内可检测到HBsAg和HBeAg持续表达（峰值一般出现在转染后第3天）、HBV DNA持续复制（10⁶～10⁸拷贝/m1）及HBV DNA复制中间体形成。结论在HepG2细胞中,建立了以杆状病毒转移载体pBlueBac4.5为基础的、1.2倍基因组长度C基因型HBV体外培养体系,有望为研究HBV耐药、筛选新抗病毒药物等提供新技术平台。