【摘 要】
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目的：观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化并对其功能进行测定。方法：采用改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞，台盼兰拒染实验观察细胞活力，利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞，倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化，定期收集培养细胞上清液，检测培养肝细胞的分泌及合成功能，并与单层胶原培养肝细胞比较。结果：平均每个鼠肝可获取2～3×108个肝细胞，活率在93±3％；体外肝细胞培
【机 构】
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首都医科大学附属北京天坛医院普外科 首都医科大学宣武医院普外科
【出 处】
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第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会
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目的：观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化并对其功能进行测定。方法：采用改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞，台盼兰拒染实验观察细胞活力，利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞，倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化，定期收集培养细胞上清液，检测培养肝细胞的分泌及合成功能，并与单层胶原培养肝细胞比较。结果：平均每个鼠肝可获取2～3×108个肝细胞，活率在93±3％；体外肝细胞培养第3天，白蛋白分泌功能、尿素合成能力恢复到最佳状态。三明治构型培养的肝细胞白蛋白分泌功能、尿素合成能力在培养的14天内始终维持较高的水平，并形成肝索样结构，伴胆小管网络形成，肝细胞形态维持达49天以上。结论：三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境，肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能，三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究，而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝功能衰竭奠定了一定的基础。
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