前言 内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals；EDCs)是指可干扰生物体内分泌平衡,影响生长发育的内源激素的产生、分泌、运输代谢及作用,从而影响生物体的生长、发育及繁殖的物质.它们并不直接作为有毒物质给生物体带来异常影响,而是对生物体起类似雌激素作用.内分泌干扰物多为有机污染物,及重金属物质.我们使用的农药大约70％-80％属于内分泌干扰物；我们所使用的塑料,其中大部分的稳定剂和增塑剂也属于内分泌干扰物；日常人们所食用的肉类、饮料、罐头等食品中也都含有内分泌干扰物.目的 本研究通过针对的雌激素受体(hERα)进行的报告基因试验方法的建立,快速筛选和鉴定环境中具有内分泌干扰效应的化学物,对控制EDCs 的危害和保护人类健康是很有必要的.方法 以恒河猴肾细胞(LLC-MK2)为转染细胞,以萤火虫荧光素酶(Luc)为报告基因,利用瞬时转染的方法,将表达hERα 的质粒与重组Luc 报告基因质粒pERE-minP-Luc2P、对照质粒pGL4.74 共转染LLC-MK2 细胞,建立由hERα 介导的荧光素酶报告基因试验方法.以雌二醇(E2),己烯雌酚(DES)作为阳性受试物,以10-5M 雌激素拮抗剂(ICI 182,780)和不同浓度的E2 共同染毒,观察Luc 表达的变化.用双酚A(BPA)和染料木黄酮(GS)对方法的有效性进行检验并比较雌激素受体反应性和灵敏度.结果 hERα 报告基因试验对E2 的最低检测限为1.9×10？11M,在1×10？8M 处获得最高诱导倍数,是对照组的30.7 倍.未转染受体表达载体hER-pcDNA3.1 的LLC-MK2 细胞用不同浓度E2 诱导,与E2 无明显反应,ICI 182,780 在10？5M 浓度下能显著抑制E2 的雌激素活性.BPA 和GS 报告基因系统中均能诱导的Luc 表达.结论及意义 本研究建立的hERα介导的报告基因试验方法是可靠的,具有较高的灵敏度和重复性.在试验中检测出BPA 和GS 有明显的雌激素活性,BPA 雌激素活性强于GS.本研究验证了pGL4 系列报告基因受体的灵敏度,用于筛选 EDCs 并进一步研究外源性化学物对雌激素受体不同亚型的干扰作用,同时对外源性化合物的拟雌激素活性大小的检测提供了可靠的途径.