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背景前期研究已发现宫内缺氧6天可导致大鼠生后及成年期肺发育不良,并可遗传至第2代(多代遗传)和第3代(跨代遗传)。目的观察宫内缺氧6天对缺氧第1代(F1),第2代(F2,多代)组和第3代(F3,跨代)组肺组织DNA甲基转移酶表达及TGF-β1甲基化改变的影响,探讨DNA甲基化变化在宫内缺氧6天所致生后肺发育不良多代及跨代遗传中的作用。方法孕15天SD大鼠缺氧处理6天后待其仔鼠自然娩出,即缺氧第1代(F1);F1雌鼠出生后不进行任何干预,成年时与正常雄鼠自然交配受孕(孕前不受进行任何处理)分娩出第2代,即缺氧第2代(F2);F2雌鼠成年时与正常雄鼠自然交配受孕分娩出第3代,即缺氧第3代(F3)。实验分组为:空气对照组,缺氧第1代组,缺氧第2代组,缺氧第3代。各组仔鼠于生后1d处死取肺检测:(1)采用Real-time PCR荧光定量法检测各组肺组织甲基转移酶(Dnmt)Dnmt1,Dnmt2,Dnmt3a mRNA的表达。(2)采用亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法各组肺组织TGF-β1的甲基化改变情况。(3)采用焦磷酸测序(Pyrosequencing)验证各组肺脏TGF-β1相应位点甲基化变化结果。(4)分别采用Real-time PCR荧光定量法以及ELISA试剂盒法检测各组肺组织中TGF-β1mRNA及蛋白的表达情况。结果 (1)宫内缺氧6天可引起缺氧第1代肺组织Dnmt1,Dnmt2mRNA表达增加,Dnmt3amR NA表达降低(p <0.05,p <0.01),此现象可传至缺氧第2代及缺氧第3代。(2)宫内缺氧6天可引起缺氧第1代,肺组织TGF-β1位点3(-595)、15(-735)、17(-795)呈显著高甲基化状态(p <0.01),此改变可传至缺氧第2代,缺氧第3代。(3)焦磷酸测序验证发现缺氧第1代TGF-β1位点15(-735)的甲基化程度明显增高,并可传至缺氧第2代,缺氧第3代DNA。(4)宫内缺氧6天可引起缺氧第1代肺组织TGF-β1mRNA及蛋白水平明显下降(p<0.05),此现象在缺氧第2代,缺氧第3代肺组织同样存在。结论宫内缺氧6天可导致肺组织Dnmt1及Dnmt2 mRNA表达水平增加、Dnmt3a mRNA表达水平下降,TGF-β1位点15甲基化水平明显增加及基因表达下调,可能是引起生后肺发育不良多代及跨代遗传的重要因素。