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禽流感是一种威胁人类和动物健康的疾病,鸟类中主要为流感A菌株,如H5N1和H9N2菌株。疫苗接种是预防禽流感的主要措施,而疫苗免疫的效果是预防的关键。本研究主要目的是探索人参多糖(GPS)和黄芪多糖(APS)提高鸡流感疫苗的效果。主要内容如下:(1)采用MTT法确定在鸡胚胎成纤维细胞中,人参多糖对H9N2禽流感病毒(AIV)的效果。在鸡胚胎成纤维细胞中在感染H9N2的前后分别添加人参多糖后检测主要组织相容性复合体(MHC)以及细胞因子的表达。体内实验中检测外周血淋巴细胞中CD3+,CD4+和CD8+T细胞的比例以及鸡血清中抗体的滴度。结果显示在鸡胚胎成纤维细胞中在感染H9N2的前后添加GPS后,MHC-Ⅱ以及细胞因子IL-2,IL-4和IL-10高表达。此项结果显示在细胞感染H9N2之前添加GPS能提高细胞的抗病毒能力,并且GPS能提高幼禽的早期体液免疫应答。(2)采用MTT法确定在鸡胚胎成纤维细胞中,黄芪多糖对H9N2禽流感病毒(AIV)的效果。在鸡胚胎成纤维细胞中在感染H9N2的前后分别添加黄芪多糖后荧光实时定量PCR检测MHCⅠMHCⅡ以及IFN-γ,LITAF,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10和IL-12等细胞因子的表达。以不同的黄芪多糖剂量梯度(5 mg/kg,10 mg/kg和20 mg/kg)饲喂鸡以检测外周血淋巴细胞中CD3+,CD4+和CD8+T细胞的比例以及鸡血清中抗体的滴度。结果显示在感染H9N2病毒前添加适当的浓度的(尤其是321.25μg/mL)黄芪多糖能显著地降低鸡胚胎成纤维细胞H9N2病毒的增殖。细胞因子检测显示感染H9N2病毒前添加黄芪多糖能有效地提高鸡胚胎成纤维细胞的抗病毒能力。体内试验显示APS免疫后外周血淋巴细胞中CD4+T的比例要高于对照组。在实验后第一周,与对照组相比,APS组鸡抗体滴度显著升高(P<0.05),此项结果显示APS能有效地提高幼禽的早期体液免疫应答。(3)免疫选取15日龄幼鸡,同时在饲料中添加黄芪多糖(100mg/kg,200 mg/kg和400 mg/kg)(第1~3组),人参多糖(100mg/kg,200 mg/kg和400 mg/kg)(第4~6组),在流感疫苗免疫后3,7,14,28天后测定血清Ig抗体水平(HI实验)以及日增重,ELISA和qRT-PCR测定细胞因子(IL-2,IL-10,IFN-β和TNF-α)的表达情况。结果显示与疫苗对照组以及空白对照组相比,所有添加多糖组都能显著地提高抗体水平和细胞因子水平(P<0.05),人参多糖组的细胞因子基因的表达显著高于相应的黄芪多糖组(P<0.05)。同样地,200 mg/kg和400 mg/kg多糖组的平均日增重显著地高于疫苗对照组以及空白对照组。由此可见,黄芪多糖和人参多糖具有提高免疫应答能力,可增强H5N1疫苗的免疫效果。本研究的结果表明两种植物多糖均可以提高禽流感的免疫效果,对禽流感的预防提供了新的方法。