【摘 要】
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克隆了四种鲨烯合酶基因片段,将其反向克隆到酿酒酵母表达载体pYeDP60/G中,获得四种含反义鲨烯合酶基因片段的酿酒酵母表达载体:pYeDP60/G/SQS12,pYeDP60/G/SQS34,pYeDP60/G/
【机 构】
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中国医学科学院; 北京协和医学院(卫生部天然药物生物合成重点实验室&中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室);
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克隆了四种鲨烯合酶基因片段,将其反向克隆到酿酒酵母表达载体pYeDP60/G中,获得四种含反义鲨烯合酶基因片段的酿酒酵母表达载体:pYeDP60/G/SQS12,pYeDP60/G/SQS34,pYeDP60/G/SQS56和pYeDP60/G/SQS78。将上述四个表达载体分别和pGADADS,pGBT9/A/HMG/G/FPP共转化酿酒酵母W303-1B和WK1,获得含反义鲨烯合酶基因片段的紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌。对上述四种酵母工程菌进行发酵培养,通过GC-MS对发酵产物进行检测,结果发现,这四种酵母工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,含反义鲨烯合酶基因片段的酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量比对照要高,鲨烯含量略有下降。实验表明反义鲨烯合酶基因的反义RNA确实能抑制鲨烯合酶基因的表达,从而促进代谢流流向紫穗槐-4,11-二烯合成途径,增加了紫穗槐-4,11-二烯的产量。
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