【摘 要】
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目的：通过体内外试验,探讨人蛔虫提取物(body extract ofAscans lumbricoides,BEAL)对小鼠LLC细胞株的细胞毒作用,建立小鼠LLC荷瘤模型,探讨人蛔虫提取物对肿瘤的作用及其免疫学机制.方法：1.人蛔虫提取物的制备2.肿瘤细胞的筛选3.绘制LLC细胞生长曲线4.LLC细胞毒性实验5.荷瘤小鼠模型的建立6.实验分组：A组-人蛔虫提取物事先干预组(BEAL+LLC)、
【出 处】
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第一次全国中西医结合检验医学学术会议
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目的：通过体内外试验,探讨人蛔虫提取物(body extract ofAscans lumbricoides,BEAL)对小鼠LLC细胞株的细胞毒作用,建立小鼠LLC荷瘤模型,探讨人蛔虫提取物对肿瘤的作用及其免疫学机制.
方法：1.人蛔虫提取物的制备2.肿瘤细胞的筛选3.绘制LLC细胞生长曲线4.LLC细胞毒性实验5.荷瘤小鼠模型的建立6.实验分组：A组-人蛔虫提取物事先干预组(BEAL+LLC)、B组-生理盐水事先干预组(NS+LLC)、C组-肿瘤造模后提取物干预组(LLC+BEAL)、D组-肿瘤造模后生理盐水干预组(LLC+NS)、E组-阴性对照组,正常饲养,不加任何处理.10d后处理各组小鼠进行实验.7.巨噬细胞的分离和培养8.脾淋巴细胞的分离和培养9.细胞因子的表达：巨噬细胞和脾淋巴细胞培养72h后收集上清,用ELISA法检测各实验组培养上清中TNF-α、IFN-Y、IL-4、IL-10的表达.10.统计学分析：用SPSS13.0处理各组实验数据,对上述实验结果进行统计学分析.
结果：1.肿瘤细胞的筛选：MTT实验结果显示,BEAL对LLC、Hepa1-6和ELA三种肿瘤细胞均有细胞毒作用,但以LLC细胞最为敏感,根据实验结果选取LLC为本实验的靶细胞株.2.细胞生长曲线：LLC细胞从第3d开始进入对数生长期,在第4d生长最为旺盛,之后增殖减慢逐渐进入平台期.3.LLC细胞毒性实验：当BEAL浓度为200μg/ml时细胞存活率为51％,因此取200μg/ml为诱导LLC细胞的浓度上限.4.BEAL对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响：所有分组中小鼠荷瘤后BEAL干预的C组抑瘤率最强,为33.33％,肿瘤明显小于同时干预的D组(P＜0.05);BEAL提前干预的A组肿瘤明显大于B组,但A组与B组比较无明显抑瘤作用;小鼠瘤重的两两比较显示,A组与B、C、D组比较均有显著性差异,C组与D组比较也有显著性差异,其余组间两两比较无显著性差异.5.ELISA检测：(1)腹膜巨噬细胞培养上清中A、B、C、D组的TNF-α含量均低于E组,但无显著性差异;A、B、C、D组的IFN-γ含量均低于E组;A组的IL-4含量高于E组,但无显著性差异,B、C、D组的IL-4含量均低于E组,且有显著性差异.A、B、C、D组的IL-10含量均低于E组.(2)脾淋巴细胞培养上清中,A、B、C、D组的TNF-α含量均低于E组;A组的IFN-γ含量明显高于E组,有显著性差异,其它各实验组与E组比较均无显著性差异;A、B、C、D组的IL-4含量均低于E组,与E组比较有显著性差异;A组的IL-10含量明显高于E组,有显著性差异.
结论：1.BEAL能够对体外培养的LLC产生细胞毒作用,并能够诱导其发生凋亡.BEAL对细胞的抑制率在一定范围内呈浓度和作用时间依赖性,在同一时间段内当BEAL浓度增加时,抑制率升高;在同一浓度下随BEAL作用时间的延长,抑制率也增加.2.通过荷瘤小鼠模型,发现BEAL影响了肿瘤的形成,在一定条件下具有明显的抑瘤作用.3.BEAL对荷瘤小鼠巨噬细胞和脾淋巴细胞分泌细胞因子产生了干扰,提示有Thl/Th2细胞的失衡.
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