【摘 要】
：
抑制牛骨髓间充质干细胞中朊蛋白基因的表达,为抗疯牛病转基因克隆牛的制作提供体细胞来源.利用RNAi技术,根据NCBI数据库中牛源PRNP基因cDNA序列,运用生物学软件设计3段siRNA序列和1个阴性对照序列,分别将其连接到RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo上构建成shRNA载体,并将构建成功的干扰载体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC)；通过Real-time PCR和Western bl
【机 构】
：
青岛农业大学动物胚胎工程中心, 山东青岛266109;山东省黑牛繁育工程技术研究中心,山东青岛266109
【出 处】
：
2015第三届中国肉牛选育改良与产业发展国际研讨会
论文部分内容阅读
抑制牛骨髓间充质干细胞中朊蛋白基因的表达,为抗疯牛病转基因克隆牛的制作提供体细胞来源.利用RNAi技术,根据NCBI数据库中牛源PRNP基因cDNA序列,运用生物学软件设计3段siRNA序列和1个阴性对照序列,分别将其连接到RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo上构建成shRNA载体,并将构建成功的干扰载体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC)；通过Real-time PCR和Western bloting筛选抑制效果最佳的载体；并用800μg/mL G418对干扰效率最佳的细胞株进行筛选.成功构建了3个靶向shRNA载体和1个阴性对照shRNA载体；转染后48h在荧光镜下检测各组均可观察到绿色荧光的表达；Real-time PCR和Western bloting结果显示,3个靶向shRNA载体在不同时间段均在一定程度上下调了PRNP mRNA和蛋白的表达,抑制了朊蛋白PrPc的生成,筛选了一个最佳干扰载体；通过药物筛选出了稳定转染的细胞株.本研究获得了一个有效抑制朊蛋白基因表达的shRNA载体,并筛选出稳定转染的细胞株,可为抗疯牛病体细胞核移植提供供体细胞.
其他文献
本试验依据胴体重(hot slaughter carcass weight,HSCW)与肌间脂肪沉积的指数生长经验理论,以品种、年龄和肌间脂肪含量水平不同的牛为研究对象,建立以qPCR为基础的肉牛肌间脂肪含量预测模型.结果表明:IMF5中单个基因的表达水平与肌间脂肪含量的相关性不强.5个基因的表达量进行拟合后与肌间脂肪含量的相关性并未获得明显提升.但在排除两组离群动物的干扰后,IMF5与肌间脂肪含
为研究安格斯牛、黑毛和牛、南德温牛与秦川牛杂交改良效果.选择安格斯牛×秦川牛杂交一代(安秦F1)、和牛×秦川牛杂交一代(和秦F1)、南德温牛×秦川牛杂交一代(南秦F1)、秦川公牛各30头作为试验牛,分别测定初生重、不同月龄(6、12、18月龄)体重、体高、体斜长、胸围和管围等指标,并进行比较分析.在相同饲养条件下,6～18月龄的安秦F1、和秦F1和南秦F1的各项体尺指标均高于秦川牛,其中安格斯牛改
选取30头体况良好,体重相近(114.57±21.56kg),年龄为3周岁左右的环湖型公牦牛,采用单向分类试验设计,随机分为3个处理组进行舍饲饲养,每个处理组5个重复,每个重复2头牛.根据中国肉牛饲养标准(2004)中体重150kg、日增重500g的肉牛营养推荐值,配制综合净能(NEmf)分别为3.72 MJ/kg(82％,低能组)、4.52 MJ/kg(100％,中能组)、5.32 MJ/kg(
康奈尔净碳水化合物和蛋白质体系(CNCPS)是一种通过所建立的模型和饲料数据库对反刍动物饲料营养价值、生长生产性能、消化代谢情况等指标进行评定和预测的体系.CNCPS历经一系列更新,已发展至CNCPS6.5版本.本文阐述了CNCPS6.5对饲料蛋白质组分的重新划分和对氨基酸的组成和利用率的更新,并利用CNCPS6.5对前期文献报道的试验条件和结果进行评估.结果表明:CNCPS6.5预测ADG与实际
瘤胃调控微生态制剂具有调节动物体内微生态平衡,促进肠胃有益菌群生长,提高动物免疫力的作用.本试验主要探讨日粮添加不同微生态制剂对奶公牛生长性能的影响,为肉牛育肥绿色高效添加剂选择和应用提供依据.试验选取36头奶公牛,随机分为2组(Ⅰ组、Ⅱ组),Ⅰ组添加某益生菌,Ⅱ组添加某酵母培养物,试验期84天.结果表明:在84d试验期内,两组试验牛始重、末重均存在差异,但差异不显著(P＞0.05);Ⅱ组试验牛采
本试验通过在相同饲养条件下,比较分析阉割奶公牛与和牛改良牛屠宰性能和肉品质,旨为利用奶公牛生产大理石花纹牛肉提供理论依据.选取自11月龄开始,在相同饲养环境和日粮水平条件下,强度育肥15个月的26月龄阉割奶公牛4头,阉割和牛改良牛5头,进行屠宰性能、肉品质对比分析.结果表明,屠宰率和肾周脂肪率两组差异不显著(P＞0.05).分割部位肉中上脑、眼肉、后臀腿、肩肉占胴体比率的两组差异不显著(P＞0.0
研究了4℃冷藏过程中牦牛肉和普通肉牛的内源抗氧化能力以及脂质氧化状态的变化,并通过逐步回归的统计方法,分析了牛肉内源抗氧化活力与脂质氧化的关系.结果表明,牦牛肉中总酚含量(TP)、DPPH自由基清除能力(RSA)、生育酚当量抗氧化能力(TEAC)和铁离子抗氧化还原能力(FRAP)在宰后初期(0 d)分别比普通肉牛高6.12％、16.03％、37.48％和4.21％(P＜0.05),二者内源抗氧化能
本文针对我国南方地区肉牛犊牛,研究代乳品中的营养水平、不同断母乳日龄对犊牛生长性能和瘤胃发酵以及血清生化指标的影响,旨在得出适合我国南方肉犊牛的适宜断母乳日龄和犊牛代乳品最佳能量、蛋白质水平,从而为我国肉用犊牛饲养提供科学依据.本文分为两个试验,内容为:(1)代乳品能量和蛋白水平对肉犊牛哺乳期生产性能和瘤胃发酵的影响.选取夏南牛与德国黄牛杂交犊牛40头,按日龄和体重相近的原则分为4组(10头/组)
Domestic ruminants under intensive management are fed diets containing high levels of readily fermentable carbohydrates (RFC), primarily starch.The rapid fermentation of starch leads to accumulation o
Yunling cattle is a three-way crossbred, of which the make-up of Yunling cattle is 1/2 Brahman, 1/4Murray Grey and 1/4 Yunnan Yellow cattle.Yunling cattle vary in color mainly from yellow, and black i