【摘 要】
：
用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中可以包涵体方式获得高表达,SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35﹪,表达产物融合了表达质粒上的6His,在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到胰蛋白原B,在复性液中复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B.然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B 110mg/L
【机 构】
：
华东理工大学生物反应器国家重点实验室(上海);中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心(上海) 中
【出 处】
：
2003年全国生化与生物技术药物学术研讨会
论文部分内容阅读
用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中可以包涵体方式获得高表达,SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35﹪,表达产物融合了表达质粒上的6His,在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到胰蛋白原B,在复性液中复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B.然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B 110mg/L发酵液,比活为13.5u/mg.该重组的羧肽酶B可应用于胰岛素原C肽的制备工艺中.
其他文献
以环氧乙烷为羟乙基化试剂,在碱性水溶液中,对牛膝多糖(Abps)进行羟乙基化,经过丙酮沉淀、膜分离、Sephades G-25柱层析等分离方法得到羟乙基化牛膝多糖(Abps-HE)纯品,检测其理化性质,并通过甲基化、GC-MS分析、HPLC、2D-NMR研究了羟乙基的在糖环上的分布,糖环上各个羟基的反应活性.药理实验表明,羟乙基化牛膝多糖对荷Lewis肺癌小鼠NK活性比母体有一定的提高.
目的:研究中药山豆根根茎尖组织培养技术,建立最佳培养条件,为人工大面积栽培中药山豆根提供试管苗.方法:先用野生山豆根种子培育无菌苗,然后切取山豆根无菌苗的茎尖长3cm左右,分别在三个不同的培养基中培养诱导丛生芽.结果:选用MS+BA2.0mg·L+NAA0.2mg·L的培养基诱导率最高.生根培养基以1/2MS+NAA1.5mg·L可使山豆根生根.
目的:对牛膝多糖进行磷酸化及其抗肿瘤活性的研究.方法:抗肿瘤实验采用小鼠Lewis肺癌足趾接种模型和小鼠S180肉瘤皮下接种模型.结果:以三氯氧磷为磷酸化试剂,以吡啶和磷酸三甲酯为溶剂,获得了高取代度、高收率的牛膝多糖磷酸酯产物.抗肿瘤实验结果表明,牛膝多糖磷酸酯对S-180和Lewis肺癌有 明显的抑制作用.结论:牛膝多糖磷酸酯对肿瘤有明显的抑制作用,并能提高NK活性.
目的:探讨败酱草抗病毒有效部位(AP3)体外抑制呼吸道合胞病毒的作用.方法:采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照药,观察AP3在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果:AP3半数中毒浓度(TC)为11.52mg/mL;抑制呼吸道合胞病毒的半数有效浓度(EC)为0.0986mg/mL;治疗指数(TI)为116.84;AP3对呼吸道合胞病毒的抑制作用,存在量效反应关系;AP3于感染后0、2、4
两头尖为毛茛料植物多被银莲花的根茎.本实验以两头尖中分离得到多种三萜化合物,发现其中三种化合物对几种刺激剂诱导的人中性粒细胞的过氧化物产生具有不同影响作用.
目的:研究黄杨叶水溶性成分的提取和活性.方法:用常规提取技术分离黄杨叶水溶性成分.结果:黄杨叶除富含生物碱外,其醇浸膏、糖类有抑菌活性,黄酮类对单纯疱疹病毒有抑制作用.结论:黄杨属植物的非生物碱成分应深入系统研究.
目的:研究复方南瓜粉对糖尿病小鼠的药理作用.方法:以四氧嘧啶法建立病理模型,观察空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、胰岛素水平、体重变化及肾脏病理改变等项指标,综合评价生存质量.结果:实验组FBG,PBG显著降低(P<0.01),胰岛素水平提高(P<0.01),对肾脏有积极的保护作用.结论:复方南瓜粉能显著改善糖尿病小鼠的生命质量,抑制糖尿病肾病的发生.
为了研究细胞悬浮培养过程中紫杉醇的生物合成,在改良Gamborgs B5培养液中加入红豆杉内生真菌诱导子,对本实验室诱导筛选的东北红豆杉B10细胞系进行悬浮培养.结果发现,在红豆杉内生真菌诱导子的作用下,细胞内紫杉醇的含量大幅度提高,其中真菌诱导子F3的诱导作用最强,且在浓度为0.04mol/L时细胞内紫杉醇的含量达到最高,因此表明红豆杉内生真菌诱导子对紫杉醇的生物合成具有明显的促进作用.
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员小鼠骨髓干细胞治疗糖尿病的可行性及机制.方法:四氧嘧啶法复制糖尿病小鼠模型后,scG-CSF 20μg·kg·d,共注射5d.给药d7、d20、d50后处死小鼠,测定血糖和尿糖,HE染色光镜观察胰腺组织结构.分离雄性健康小鼠原代骨髓干细胞,对雌性糖尿病小鼠进行胰腺实质内定点注射移植50μl(10/ml),15d后处死,测定尿糖,取胰腺、肝、脾、骨髓,分
目的:研制一种能把药物定向导入肝脏组织的肝靶向药物载体.方法:用还原氨化法合成乳糖-赖氨酸(Lac-Lys)共价结合物作为靶向药物载体.离子交换层析分离后用红外光谱法确定其结构.采用含HBV反义x基因的质粒DNA经DH5α菌扩增,提取质粒后在一定条件下与乳糖-赖氨酸制成复合物转染料HepG2(2.2.15).用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中的HBsAg,观察不同浓度、不同作用时间