【摘 要】
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目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,
【机 构】
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南京医科大学病理学系 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏南京 210029
【出 处】
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2009中国南京ERCP、EUS、ESD论坛
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目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage EIJSA、BstOI酶切片断分析进行检测,获得阳性克隆,作可溶性表达和鉴定。结果:Fab噬菌体抗体库的库容为1.2×109,并从中筛选到一株与c-Met结合的人源抗体克隆,命名为AM2-26,DNA序列分析证明为人免疫球蛋白可变区基因,Western blot证实表达出了人源抗c-Met Fab抗体片段,ELISA特异性鉴定阳性。结论:构建了大容量人源天然Fab抗体库,从中获得一株抗c-Met人源Fab抗体片段,有望为抗肿瘤药物的研制提供新的候选分子。
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