【摘 要】
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为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182 bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高，为100％。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和Sel
【机 构】
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东北农业大学 动物营养研究所,黑龙江 哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001
【出 处】
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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛
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为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182 bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高，为100％。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和Sel Ⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD3。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，于37℃用IPTG诱导表达，SDS—PAGE电泳表明，重组鹅AvBD3蛋白在原核高效表达(分子量约31 kDa)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性，结果显示，重组鹅AvBD3蛋白具有广谱的抗菌活性，对12种细菌，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD3蛋白的抗菌活性。此外，该重组蛋白的溶血活性极低，并对酸碱度具有较高的稳定性。
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J亚群禽白血病病毒是禽的一种致肿瘤反转录病毒，目前在中国给养禽业造成了严重的经济损失。病毒感染后宿主细胞蛋白的差异表达对研究病毒的致病机理比较重要，本文应用二维电泳结合质谱分析的蛋白质组学方法探讨了DF-1细胞在感染ALV-J后不同时间点的细胞蛋白变化情况。结果发现差异表达蛋白主要集中在感染后6-12h，质谱分析共鉴定出74个差异蛋白，其中30个上调，44个下调。在这些蛋白中，我们发现DJ-1、U
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分别在正常环境和限铁环境下培养1型鸭疫里默氏杆菌，提取分泌蛋白。应用双向电泳和质谱技术比较在两种培养环境下鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白的表达差异。结果显示，在限铁环境下鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白中表现出表达量上升的蛋白质点共有23个，选取差异明显的13个点做质谱分析，这13个蛋白质点分别代表7种蛋白质，其中1个是Ⅲ型纤维连接蛋白，1个是分泌蛋白家族，1个是酶类，1个是亮氨酸富集蛋白质，4个是鸭疫里默氏杆菌假
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