毛细管电泳技术是在线酶测定和酶反应动力学研究的一种有效分析手段。不断发展以毛细管电泳为基础的新分析方法,提高酶分析的准确性、重现性和分析效率,对相关研究领域具有重要意义,是该研究方向的难点和热点问题。当前,基于毛细管电泳技术的酶反应在线研究通常仅分析反应的某一时刻,而不是对酶反应全过程的实时在线检测。其困难在于不仅需要高时间分辨检测的技术手段,而且需要解决毛细管电泳自动多次进样并确保微量进样的重现性。最近,我们建立了两种不同的毛细管电泳在线酶分析方法,实现了酶反应全程的高时间分辨在线检测。利用光快门漂白进样结合激光诱导荧光(LIF)技术,并采用固定化酶,我们建立了酶切反应和抑制反应的高时间分辨在线测定平台,保证了快速多次进样的重现性和准确性,首次实现了在同一张电泳图谱中对酶反应全程5s时间分辨的自动在线检测[1]。光快门漂白进样的进样时间和频率由光快门精确控制,反应物和底物在电渗流的作用下分离并被LIF检测。由于光快门控制多次进样具有很高精度,而LIF检测具有高灵敏度,该技术可以同步对底物减少和产物增加进行在线时间分辨准确检测。从底物浓度的减少和反应物浓度的增加获得了高度一致的酶反应动力学数据,证实了该技术的可靠性。在此基础上,我们提出了更为简单有效的在线连续酶分析的新方法[2]。利用穿过样品池的两根相隔5μm的毛细管,依据氨基酸的柱上快速衍生扩散,通过自动控制分离电压的开关,实现了准确的在线序列进样及分析。氨基酸(Alu和Glu)的标准混合溶液分析表明,该技术具有极高的进样重现性,20次连续进样的RSD低于1％。利用该技术我们研究了GPT酶催化反应,对底物和产物实现了反应全程的时间分辨检测。该技术不仅提供了一种自动无干扰连续进样的新方法,而且可用于酶反应的连续测定,对在线柱上衍生以及其他类似化学反应的研究亦提供了一种新思路。上述工作推进了毛细管电泳在线酶分析的研究,为更准确检测酶反应动力学提供了新的方法。研究工作受到国家自然科学基金资助(批准号20805005,21175018)