【摘 要】
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Crustin 是一种在甲壳类动物的免疫系统中起重要作用的抗菌肽.本文通过反转录三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)鳃的mRNA 获得第一股cDNA,通过巢式PCR 获得PtCrustin3 的成熟肽基因,并通过PCR 方法在5端添加EcoR I 酶切位点,在3端添加Xba I 酶切位点和6×His 组氨酸标签.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA 连接,构建重组表达
【机 构】
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上海海洋大学,食品学院,上海 201306
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Crustin 是一种在甲壳类动物的免疫系统中起重要作用的抗菌肽.本文通过反转录三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)鳃的mRNA 获得第一股cDNA,通过巢式PCR 获得PtCrustin3 的成熟肽基因,并通过PCR 方法在5端添加EcoR I 酶切位点,在3端添加Xba I 酶切位点和6×His 组氨酸标签.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA 连接,构建重组表达载体pPICZαA-mPt3；电转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33 中,经过Zeocin 筛选以及酵母基因组DNA 的PCR 鉴定,获得表达菌株.筛选的表达菌株用0.75％甲醇,在29℃、pH6.0 诱导表达96h；采用金属螯合柱亲和层析对培养液上清进行纯化,SDS-PAGE 分析证明获得纯化的mPt3.
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独角雪冰鱼(Chionodraco hamatus,CH)和伯氏肩孔南极鱼(Trematomus bernacchii,TB)属于鲈形目,生存条件相似,但是冰鱼体内没有正常表达的血红蛋白,冰鱼的心脏是其他硬骨鱼类心脏的2-3倍。这种补偿性心脏增生发育涉及到许多基因的表达与调控。已有不少研究表明,心肌肥大生理特征涉及众多的基因及多个小分子RNA的调控,但是研究机制并不是很清楚。本文将独角雪冰鱼与伯氏
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MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20～25 个核苷酸,miRNA 通过与靶基因序列结合对其产生翻译抑制或降解从而参与一系列重要的生物过程.在血细胞发生和发育中,miRNA 在基因转录后水平的调控起着重要作用.我们的工作主要基于南极冰鱼体内特殊的血液系统(缺乏血红蛋白,无功能性血红细胞),对鳄冰鱼科的独角雪冰鱼和南极鱼科的贝氏肩孔南
为了解色素相关基因与体色变化的关系,采用RACE 技术获得橘色双冠丽鱼酪氨酸酶(TYR)基因cDNA 序列,并利用RT-PCR 分析了橘色双冠丽鱼体色变化不同时期和不同组织中TYR 基因的表达差异.试验获得cDNA 全长序列2683 bp,其中阅读框1619bp,编码 540 个氨基酸,5′UTR 区246bp,3′UTR 区817bp.氨基酸序列和系统发育分析表明,相比与脊椎动物间的保守性,TY
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