【摘 要】
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根据现有文献及DNAstar软件分析.选取马立克氏病病毒(MDV)GA株糖蛋白B 250-460位氮基酸为目的片段。根据Genbank发表的序列设计五条引物Primer(U1)、Primer(U2)、Primer(D1)
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
【基金项目】
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江苏省兽用生物制品工程中心开放项目资助
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根据现有文献及DNAstar软件分析.选取马立克氏病病毒(MDV)GA株糖蛋白B 250-460位氮基酸为目的片段。根据Genbank发表的序列设计五条引物Primer(U1)、Primer(U2)、Primer(D1)、Primer(D2)和Primer(LD).分别以Primer(U1)和Primer(U2)、Primer(D1)和Primer(D2)、Primer(U1)和Primer(D2)以及Primer(L/D)和Primer(D2)为引物对.PCR扩增出gB(U)、gB(D)、gB(S)和gB(L/D)。将PCR产物分别克隆入pBluescriptsKII+,构建成pSKgB(U1、pSKgB(D)、pSKgB(S)和pSKgB(L/D)。从pSKgB(U)以XbaI+BamHI酶切出gB(U),分别克隆入pSKgB(D)和pSkgB(L/D).构建成pSKgB(U/D)和pSKgB(U/L/D)。从pSKgB(S)、pSKgB(U/D)和pSKgB(U/L/D)中以XbaI+PstI酶切出gB(S)、gB(U/D)和gB(U/L/D).分别克隆入pEFgptl2S.构建成pEFMDgB(S)、pEFMDgB(U/D)和pEFMDgB(U/L/D)三个鸡痘病毒转移质粒载体.用于下一步与鸡痘病毒进行同源重组构建三种表达MDV GA株gB主要抗原决定簇基因的预防马立克氏病的重组鸡痘苗。
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