不同保存方法对"临床即用型"脂肪源性干细胞活性影响的评估

来源 :首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cedzyh
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  背景:脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal vascular fraction cells/stem cells,SVF/ADSCs)作为成体干细胞家族的新成员因具有来源丰富、取材容易、增殖迅速、多项分化潜能、低免疫原性和免疫调节作用,在再生医学领域展现了广阔的应用前景,并作为一种新的细胞产品或新技术用于整形美容外科的临床治疗,取得可喜效果.由于临床治疗的特点和需要,作为细胞产品从制备完毕到治疗使用前的这一时间段(包括细胞产品的运输)如何保持细胞产品仍处于活力最佳状态或进入人体后能发挥较好的治疗效果,保存的方法是一个值得高度关注的问题.目的:通过观察比较几种符合临床使用规范的保存液、不同储存温度和时间对ADSCs增殖、凋亡及分化能力的影响.探讨在临床应用过程中,ADSCs细胞被提取后即将使用前或运输过程中的短时间内能够维持细胞最佳生物学活性的保存方法,以确保细胞在用于人体治疗之前处于最佳状态.方法:从临床抽脂病人获取的脂肪组织提ADSCs,培养纯化至第二代,以每组1-3×105cell/2ml的密度分别悬浮于PBS、0.9%生理盐水、10%人血清溶液、10%富血小板血浆(PRP)溶液中,并分别于4℃、室温(25-28℃)中保存2、4、6小时后,通过cck8细胞增殖实验观察增殖能力,通过流式细胞仪观察细胞周期、凋亡,通过诱导成脂实验观察细胞分化能力.结果:同样时间条件下,4℃保存明显优于室温(25-28℃)下保存;而随保存时间的增长ADSCs的存活率及增殖能力呈递减趋势,其中保存6小时后差异最为明显.4℃ 10%人血清溶液组在细胞存活率最高,而细胞增殖实验中4℃10%PRP溶液组最佳.结论:ADSCs被提取后即将使用前或运输过程中的短时间采用10%人血清、在4℃条件下保存符合临床规范,且能较好保持细胞活性.已制备的"临床即用型"细胞产品最好能在4小时前使用.
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