【摘 要】
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目的:外泌体（exosomes）分泌的microRNA（miRNA）是疾病新型的液体活检指标。本文检测分析原发性儿童肾病综合征患者尿液外泌体mi RNA的表达谱,鉴定出显著升高的miRNA,评价其临床价值。方法:收集130例肾病综合征患儿晨尿,以129例正常儿童晨尿作为对照;超高速离心技术分别提取5组患者的混合尿液和4组健康儿童的混合尿液（每组5份标本混合在一起）外泌体;电镜、纳米颗粒跟踪分析技术
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目的:外泌体（exosomes）分泌的microRNA（miRNA）是疾病新型的液体活检指标。本文检测分析原发性儿童肾病综合征患者尿液外泌体mi RNA的表达谱,鉴定出显著升高的miRNA,评价其临床价值。方法:收集130例肾病综合征患儿晨尿,以129例正常儿童晨尿作为对照;超高速离心技术分别提取5组患者的混合尿液和4组健康儿童的混合尿液（每组5份标本混合在一起）外泌体;电镜、纳米颗粒跟踪分析技术和western blot鉴定exosomes;高通量的光合成测序（SBS）技术分析miRNA表达谱;用exosomes提取试剂盒对所有尿液样本逐一提取外泌体,qRT-PCR在两个独立样本组中逐步验证;并对其中66例患者进行治疗前后的比较。结果:SBS技术分析显示,肾病综合征患儿尿液exosomes中miRNA表达谱与正常对照有明显差异,15种miRNA水平显著升高（＞10倍,P＜0.05）。qRT-PCR证实其中5种miRNA （miR-194-5p, miR-146b-5p, miR-378a-3p, miR-23b-3p和mi R-30a-5p）显著高于对照组（大于3倍,P＜0.01）,而在患者经治疗尿蛋白转阴后显著下降（P＜0.001）。其中miR-194-5p和miR-23b-3p的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.800（95%CI,0.746-0.853）和0.772（95%CI, 0.716-0.829）。5种miRNA在尿exosomes中的水平均与血白蛋白显著负相关,而与血甘油三酯、胆固醇、尿素和肌酐显著正相关。此外,miR-194-5p和mi R-23b-3p与尿蛋白含量显著负相关（r=0.295, P=0.002; r=0.200, P=0.039）,这两种miRNA在高尿蛋白组中的水平显著高于低尿蛋白组。结论:儿童原发性肾病综合征患者尿液外泌体中5种miRNA包括miR-194-5p、miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-23b-3p和mi R-30a-5p水平显著高于正常儿童,而在治疗改善后显著下降。其中miR-194-5p和miR-23b-3p有较高的诊断准确性,且与尿蛋白水平显著相关,提示这些miRNA有望作为儿童肾病综合征新的潜在的诊断和治疗监控分子标志物。
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