【摘 要】
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本文探索并建立了斑节对虾血淋巴双向电泳技术体系,对斑节对虾血淋巴总蛋白抽提方法进行优化,去除了高丰度蛋白；对双向电泳程各步骤,如pH胶条的选择、等电聚焦程序、上样量等进行了优化,得到高分辨率的2-DE图谱；用PDQuest软件进行了初步分析。实验结果表明,用PEG 6000能更快捷有效的去除血淋巴中的高丰度蛋白,增加低丰度蛋白的点数及浓度；在抽提蛋白过程中,利用预冷的80％丙酮洗涤；在一向电泳过程
【机 构】
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中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部南海渔业资源开发利用重点实验室,广州广东,510300;华南农业大学动物科学学院,广州广东,510642
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本文探索并建立了斑节对虾血淋巴双向电泳技术体系,对斑节对虾血淋巴总蛋白抽提方法进行优化,去除了高丰度蛋白；对双向电泳程各步骤,如pH胶条的选择、等电聚焦程序、上样量等进行了优化,得到高分辨率的2-DE图谱；用PDQuest软件进行了初步分析。实验结果表明,用PEG 6000能更快捷有效的去除血淋巴中的高丰度蛋白,增加低丰度蛋白的点数及浓度；在抽提蛋白过程中,利用预冷的80％丙酮洗涤；在一向电泳过程中设置100V低压除盐,能更有效的去除蛋白中的盐分；采用18 cm,pH 3～10 NL的中型胶条,能更好的显示低丰度蛋白点的分布；被动水化上样300μg结合硝酸银染色方法,能有效提高双向电泳图谱中蛋白点的分离度和分辨率。所得结果,对斑节对虾及其它甲壳动物血淋巴蛋白质组学相关后续研究提供可重复和稳定的实验方法。
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