【摘 要】
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目的：炎症是动脉粥样硬化性疾病的重要诱因.在动脉硬化发生的过程中,血管内皮细胞的炎症促进因子IFNγ表达上调.提示IFNγ可能在动脉粥样硬化的发生过程中起重要作用.本实
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目的：炎症是动脉粥样硬化性疾病的重要诱因.在动脉硬化发生的过程中,血管内皮细胞的炎症促进因子IFNγ表达上调.提示IFNγ可能在动脉粥样硬化的发生过程中起重要作用.本实验旨在构建IFNγ转基因小鼠,以期获得动脉粥样硬化转基因小鼠模型,为动脉粥样硬化的机理研究和药物开发提供新思路.方法：原代分离小鼠脾细胞,ConA活化后,从中扩增出IFNγ的CDS基因全长序列.将其连接到pGEM-T载体上,酶切鉴定并测序,再定向连接至真核表达载体pcDNA 3.1中,命名为pcDNA 3.1-mIFNγ.经DEAEDextran转染至cos-7细胞,检测其在细胞内外的表达.将制备好的质粒线性化后用Sephadex G-50进行凝胶层析纯化.水平显微注射法将其导人450枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核.将注射后存活的约300枚受精卵移植入10只当日见栓的假孕ICR雌鼠输卵管中.仔鼠出生10天后,提取尾尖组织DNA,PCR扩增鉴定仔鼠基因型.结果：RT-PCR扩增的IFNγ测序结果显示其与GenBank上公布的序列的同源性为100％.构建的真核重组表达质粒pcDNA 3.1-mIFNγ转染cos-7细胞后,可检测到mIFNγ的转录和表达.共产生52只子代小鼠,经PCR检测获得转基因阳性首建鼠4只,全部稳定遗传并建系.结论：本实验成功构建了pcDNA 3.1-mIFNγ真核表达载体,初步获得了稳定整合mIFNγ基因的转基因小鼠,进一步进行基因表达情况与病理学方法检测后有望建立小鼠动脉硬化模型,促进抗动脉粥样硬化机理研究和药物开发.
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