抗胸腺素α原(Prothymosin alpha)单克隆抗体的制备鉴定及在膀胱癌诊断中的应用研究

来源 :2013年肿瘤多学科综合诊治新进展学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:c13140608886
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  目的 以由中国人外周血淋巴细胞克隆表达的人胸腺素alpha原为抗原,制备单克隆抗体,并对其进行分离纯化与鉴定,应用所制备的抗体检测膀胱癌及正常人尿样中的胸腺素alpha原。方法 重组人胸腺素alpha原由本实验室克隆表达,纯度为96%(HPLC),以此为抗原制备完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂,免疫Balb/C小鼠,ELISA检测抗体达到合适效价后,分离小鼠脾脏淋巴细胞,应用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,经筛选获得3株阳性克隆,分离纯化获得纯化抗体。采用ELISA试验,斑点杂交和Wester-blot方法对所得抗体进行鉴定;应用所制备的单克隆抗体,采用斑点杂交技术检测尿样。结果 实验所制备的3株细胞株产生的单克隆抗体均能够与标准品、肿瘤细胞及胸腺组织产生阳性反应,表现出明显的特异性。检测由三甲医院提供的确诊为膀胱癌的病人的尿液为实验组共28例,同时以健康人尿液为对照组共50例,进行检测。结果发现,病人尿液中胸腺素alpha原的检测,25例为强阳性,3例为弱阳性,阳性率100%;而健康人尿液仅有3例为弱阳性,其余均无明显斑点。结论 实验结果表明,所获抗体能够用于细胞中胸腺素alpha原的定位检测,样品中胸腺素alpha原的定量分析,同时建立的免疫学方法可以用于膀胱癌病人的体外诊断。为深入研究胸腺素α原的功能和开发诊断膀胱癌的技术提供了有力工具。
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