NRAGE对小鼠牙髓细胞增殖和分化的影响

来源 :2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:long_drago
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  目的:探讨神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白(Neurotrophin receptormediated MAGE homology,NRAGE)对小鼠牙髓细胞(mouse dental pulp cells, mDPCs)增殖和分化能力的影响.材料与方法:体外组织块法原代培养mDPCs并鉴定.mDPCs成牙本质体外诱导后,采用实时定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测NRAGE在细胞分化过程中的表达变化.构建NRAGE基因的特异性RNA干扰(shRNA)慢病毒载体并感染体外培养的mDPCs,获得稳定的NRAGE-shRNA mDPCs.实验分三组:NRAGE-shRNA慢病毒感染的mDPCs组(shRNG组),空慢病毒感染的阴性对照组(shCon组)和正常细胞的正常对照组(wt组).采用细胞生长曲线测定(Cell counting kit-8,CCK-8),检测NRAGE敲减后对mDPCs增殖能力的影响;对各组细胞行体外成牙本质分化诱导后,采用碱性磷酸酶(ALP)染色法和茜素红染色法分别检测ALP表达和矿化结节形成的差异,并检测ALP活性、RT-PCR检测诱导后各细胞组中分化相关基因ALP、牙本质基质蛋白-1(dental matrix protein-1,DMP1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)的mRNA水平;WB检测各组细胞分化过程中牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein, DSP)和DMP1蛋白表达水平.结果:在mDPCs分化过程中,NRAGE的mRNA和蛋白质表达水平逐渐下调.与shCon组和wt组相比,shNRG组细胞增殖能力显著降低;shNRG组诱导后ALP染色和矿化结节数量较wt组和shCon组明显增多,ALP、DSPP/DSP、DMP1的mRNA和蛋白表达水平较wt组和shCon组显著性增强(P<0.05).结论:NRAGE下调表达后,mDPCs的体外增殖受到抑制,mDPCs向成牙本质细胞的分化能力增强.研究结果提示,NRAGE对mDPCs的增殖和分化发挥着重要作用.
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