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目的近年研究发现,血管内皮细胞结构或/和功能受损是动脉粥样硬化(AS)性疾病的始动因素和前提条件。银杏提取物(GBE)作为一种作用广泛、不良反应较少的天然药物可通过多种药理途径来防治AS发生、发展。银杏黄酮苷元(GA)作为改变黄酮配糖体构型的新型GBE是否可通过促进内皮修复、改善内皮功能而在抗AS方面发挥作用,目前尚不清楚。本课题采用体外细胞培养的方法,探讨GA对内皮细胞增殖及对ox-LDL诱导内皮细胞MCP-1和P-选择素表达异常的调节作用,并对其作用机制进行初步探讨,以便为GA用于防治AS相关性疾病提供理论及实验室证据。方法用不同浓度GA溶液与血管内皮细胞株(ECV304)共同孵育不同时间,观察细胞形态,并用四甲基噻唑兰(MTT)法测定各组细胞存活率;用50mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)分别与不同浓度GA作用48h或与25mg/L GA作用不同时间进行单独或联合刺激,同时以250mg/L植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)受体阻断剂聚肌苷酸(PIA)预处理2h进行干预。以酶联免疫(ELISA)方法检测各组细胞培养液上清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和P-选择素蛋白含量,用免疫组化法检测各组细胞LOX-1的蛋白含量,用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测MCP-1、P-选择素和LOX-1的mRNA表达。结果①50～6.25mg/L GA与ECV304共同培养6～48h细胞形态基本正常,细胞存活率均大于100%;25～6.25mg/L和6～24h段GA作用组细胞存活率随药物浓度增加和作用时间延长而增加,各组间比较差异显著(p<0.05),与对照组(未加药)比较,差异显著(p<0.05)。②与ox-LDL组比较,50～6.25mg/LGA与ECV304共同培养6～48h均可明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1和P-选择素表达(p<0.05),且随着药物浓度增加和作用时间延长其抑制效应增加,以25mg/L或50mg/L作用48h最明显。③与ox-LDL组比较,50～6.25mg/L GA与ECV304共同培养6～48h均可明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1表达(p<0.05)。④PIA可部分或完全阻断ox-LDL诱导内皮细胞MCP-1、P-选择素及LOX-1的表达(p<0.05)。结论①25～6.25mg/LGA可明显促进血管内皮细胞增殖,且该效应有一定的浓度和时间依赖关系,以25mg/L作用48h最明显。②50～6.25mg/LGA可明显抑制ox-LDL诱导内皮细胞MCP-1和P-选择素表达,且该效应呈一定浓度和时间依赖关系,以25mg/L或50mg/L作用48h最明显;GA对ox-LDL诱导内皮细胞粘附功能异常有明显的调节作用。③25mg/LGA可明显抑制ox-LDL诱导内皮细胞LOX-1过量表达;LOX-1可能为MCP-1和P-选择素表达的上游调节因子;GA抗内皮细胞粘附功能异常的作用可能通过抑制LOX-1的表达来实现。④GA可促进内皮细胞增殖、改善内皮细胞粘附功能异常,在AS相关疾病防治方面具有应用前景。