【摘 要】
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus,MRSA)是引起院内感染的主要病原菌之一,易引起交叉感染,耐药性和致病能力强,极大地增加了临床
【机 构】
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中国科学院安徽光学精密机械研究所中国科学院安徽光学精密机械研究所;皖江新兴产业技术发展中心
【出 处】
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第九届全国微全分析系统学术会议、第四届全国微纳尺度生物分离分析学术会议、2014国际微流控芯片与微纳尺度生物分离分析学术
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus,MRSA)是引起院内感染的主要病原菌之一,易引起交叉感染,耐药性和致病能力强,极大地增加了临床治疗难度[1].纸片扩散法、琼脂稀释法、PCR扩增电泳法等传统检测方法耗时长、需要样本量多、实验成本高、操作复杂[2].研究发现,femA基因是金葡菌携带的特异性基因,而mecA基因编码产生的青霉素结合蛋白(PBP-2a)对J3一内酰胺类抗菌药物亲和力低,致使在较高的药物浓度下仍继续生长繁殖表现其耐药性[3].因此,可通过同时检测特异性基因femA和mecA对MRSA进行快速鉴别,本文发展一种基于微流控荧光定量PCR的致病菌快速检测新技术.采用光刻法制作了微流控PCR芯片,研制了集成高性能温度控制模块和高灵敏度荧光检测模块的微流控荧光定量PCR分析系统[4].加热制冷模块的升温速率为11.25℃/S,降温速率为5.08℃/S.PCR反应试剂按照PCR试剂盒说明进行相应比例的配制.20.2μL的反应体系包括18μL的MRSA耐药基因核酸荧光PCR检测混合液与0.2μL酶(Taq+UNG)以及2μL的DNA模板(浓度为0.4 ng/μL).从配置的20.2μL体系中抽取6μL注入微流控芯片中,密封芯片.在微流控荧光定量PCR平台上进行PCR反应.实验结果表明,使用微流控PCR芯片可以成功实现MRSA特异性基因的快速检测,相对传统的管式PCR,芯片使用6μL试剂在30分钟内就完成了MRSA特异基因的检测,不仅节约了反应试剂,而且极大提高了检测速度.该技术可扩展到其他致病菌的检测,具有良好的应用前景.
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