【摘 要】
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目的芋螺毒素αO-GeXIVA是利用cDNA克隆技术从我国南海海域的将军芋螺中鉴定的一种新型芋螺毒素,由28个氨基酸组成,包含4个半胱氨酸,可通过半胱氨酸之间形成二硫键产生3种异构体。其中,GeXIVA[1,2]是迄今为止活性最强的特异性阻断α9α10乙酰胆碱受体的芋螺毒素,其半阻断剂量为3.8nM,在慢性压迫性神经痛模型中展现出强于吗啡1000倍的镇痛活性,具有极大的临床药用价值。本研究旨在开发
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所
【出 处】
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中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集
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目的芋螺毒素αO-GeXIVA是利用cDNA克隆技术从我国南海海域的将军芋螺中鉴定的一种新型芋螺毒素,由28个氨基酸组成,包含4个半胱氨酸,可通过半胱氨酸之间形成二硫键产生3种异构体。其中,GeXIVA[1,2]是迄今为止活性最强的特异性阻断α9α10乙酰胆碱受体的芋螺毒素,其半阻断剂量为3.8nM,在慢性压迫性神经痛模型中展现出强于吗啡1000倍的镇痛活性,具有极大的临床药用价值。本研究旨在开发和验证基于LC-MS/MS的大鼠血浆中GeXIVA[1,2]的分析方法,以及基于放射性125I同位素标记的大鼠组织分布分析方法,以探究GeXIVA[1,2]临床前药代动力学特征和组织分布特征。材料和方法药代动力学研究基于LC-MS/MS法,大鼠血浆样品首先经OROCHEM RubyPro SAX固相萃取板提取:依此使用500μL甲醇和水淋洗填料;加入100μL血浆样品;500μL 5%氨水-水淋洗;500μL甲醇淋洗;最后使用200μL 0.2%甲酸-30%甲醇-69.8%水溶液洗脱。洗脱液经氮气吹干后使用含15%乙腈的水溶液复溶,涡旋混匀后供LC-MS/MS检测。使用岛津InertSustainBioC18色谱柱（2.1 mm I.D.×100mm,1.9μm,200?）,柱温为45℃。流动相A为含0.02%甲酸的水,流动相B为含0.02%甲酸的乙腈。洗脱条件:15-15%B（0-1 min）,15-90%B（1-1.5 min）,90-90%B（1.5-3 min）,90-15%B（3.1-4 min）,总时长5min,流速0.35 mL/min。质谱条件为电喷雾离子源,正离子模式,多反应离子检测,检测离子为GeXIVA[1,2]（576.6→70.2）,内标[I23A]GeXIVA[1,2]:（569.6→70.2）,均为[M+6H]6+多电荷离子对。组织分布研究基于放射性125I同位素标记法,使用Iodogen法将125I标记至GeXIVA[1,2]上,经GE PD-10脱盐柱分离后检测放射比活度及放化纯度。加125I-GeXIVA[1,2]组织以20%TCA沉淀,离心,通过沉淀放射性考察组织分布。结果药代动力学:大鼠血浆中的GeXIVA[1,2]在20-1000 ng·mL-1范围内线性良好（R~2>0.99）,定量下限为20 ng·mL-1（CV99%,蛋白量与总放射性和TCA沉淀放射性线性在10-5000ng·mL-1范围内线性关系良好（R2>0.99）,定量下限为10 ng·mL-1（CV<20%）。批内及批间的精密度和准确度均在可接受范围内（CV<15%,RE<±15%）结论开发及验证了LC-MS/MS及放射性125I同位素标记用于检测生物样品中GeXIVA[1,2]的浓度,满足GeXIVA[1,2]的临床前药代动力学和组织分布研究需求。
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