副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是革拉瑟氏病(Glassers disease)的病原体,该病以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征,对养猪业危害严重并造成巨大的经济损失.HPS的主要毒力因子以及保护性抗原目前还不是很清楚,这大大妨碍了高效疫苗的研制和该病的免疫防制.一般来说,病原细菌的主要毒力因子和保护性抗原往往是其分泌到菌细胞外的毒素和一些酶类,以及位于细菌表面的外膜蛋白等.本研究利用免疫蛋白质组学(Immune proteomics)技术对HPS分泌组中的保护性抗原进行了筛选和鉴定.一共鉴定到了6种具有良好反应活性的蛋白，分别是亚铁血红素结合蛋白HbpA、过氧化氢酶Catalase、寡肽透酶OppA、寡肽胞周结合蛋白OppA2、外膜蛋白P2以及参与Fe3+和ATP结合转运的AfuA蛋白。以上6种蛋白经原核表达载体pET-28a(+)克隆后都得到了良好表达，纯化的6种重组蛋白经western blot及ELISA检测验证，均具有良好的反应活性;6种重组蛋白免疫小鼠后可以刺激机体产生较高滴度的抗体，对HPS血清5型强毒株Nagasaki 5倍LDP剂量菌的攻击能够提供良好的保护力，保护率均介于50~80％之间。结果表明，本研究筛选和鉴定到的这6种蛋白可以作为亚单位疫苗的候选抗原。