【摘 要】
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本文首先开展了高产、高活力烟草原生质体制备技术研究.取8 ～10周室温培养的烟草K326叶片,使用刀片在叶背部轻划且不划破叶片,将其加入10mL附加不同浓度的甘露醇以及不同
【机 构】
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沈阳农业大学植物保护学院,沈阳 110866
【出 处】
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中国植物病理学会2014年学术年会
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本文首先开展了高产、高活力烟草原生质体制备技术研究.取8 ～10周室温培养的烟草K326叶片,使用刀片在叶背部轻划且不划破叶片,将其加入10mL附加不同浓度的甘露醇以及不同浓度的纤维素酶(Cellulase R-10)和离析酶(Macecozxme R-10)的酶解液中进行酶解,遮光26℃慢速震荡培育4h.酶解结束后将原生质体过滤并以不同的离心转速和离心时间进行离心,弃上清.以MMC溶液(0.5mol/L甘露醇、10mmol/LCaC12、5mmol/L MES)洗涤3次,最终得到原生质体.体系优化结果表明,经过1％纤维素酶,0.5％离析酶,0.1％ MES,0.6mol/L甘露醇的酶解处理,26℃慢速振荡(40r/min)酶解4h,700r/min离心3min后,所得到烟草原生质体产量及存活率最高.采用上述方法对不同品种烟草的原生质体制备进行了研究,结果表明与NC89、中烟201、龙江981、心叶烟和红花大金元等品种比较,烟草品种K326的叶片所获得的原生质体其产量及存活率最高,细胞碎片也最少.
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