【摘 要】
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顶复门原虫作为专性胞内寄生病原,其逸出过程作为两次胞内周期的连接点对于本门原虫的生存和繁殖具有举足轻重的作用.因此,对该过程的研究有助于了解这类寄生原虫的致病机理,为开发新型有效的抗寄生虫药物提供科学依据.刚地弓形虫作为顶复门原虫的模式生物,有关其逸出过程的研究相对成熟.目前已发现并研究了多种与虫体逸出相关的蛋白,如：TgNHE1、TgPLP、TgCDPK1等.然而对于本门的另外一种重要病原艾美耳
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京 100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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顶复门原虫作为专性胞内寄生病原,其逸出过程作为两次胞内周期的连接点对于本门原虫的生存和繁殖具有举足轻重的作用.因此,对该过程的研究有助于了解这类寄生原虫的致病机理,为开发新型有效的抗寄生虫药物提供科学依据.刚地弓形虫作为顶复门原虫的模式生物,有关其逸出过程的研究相对成熟.目前已发现并研究了多种与虫体逸出相关的蛋白,如：TgNHE1、TgPLP、TgCDPK1等.然而对于本门的另外一种重要病原艾美耳球虫,虽已有学者涉足其逸出过程的研究,但对其逸出相关蛋白的研究尚未见报道.Perforin-like Protein(PLP)是一种新发现的蛋白,在刚地弓形虫、恶性疟原虫的逸出过程中起到关键作用.柔嫩艾美耳球虫的该基因中与上述两种原虫有高度保守的同源序列.本研究旨在克隆表达柔嫩艾美耳PLP蛋白并对其相关特性进行初步研究.通过基因克隆技术以柔嫩艾美耳球虫M2e株为模板成功获得了EtPLP序列,并进行了原核表达、蛋白纯化,将制备的兔源多克隆抗体用于间接免疫荧光(IFA)实验和免疫印迹(WB)实验.IFA实验中用兔源抗体和鼠源抗体分别标记EtPLP和EtMIC 2,发现该蛋白定位于柔嫩艾美耳球虫的微线体；WB实验发现该蛋白具有Ca2+和温度依赖性.本实验还利用生物信息学软件筛选EtPLP realtime-PCR引物,制作了标准曲线和溶解曲线,建立了利用realtime-PCR检测EtPLP表达的方法.综上所述,本研究对柔嫩艾美耳球虫EtPLP蛋白进行了初步研究,后续实验将重点研究其在虫体逸出过程中所发挥的作用.
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