【摘 要】
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目的 表没食子儿茶素没食子酰胺(EGCG)是2-连苯酚基苯并吡喃与没食子酸形成的酯,是绿茶茶多酚的主要活性成分,具有抗氧化、抑瘤、抗突变等多种生物学活性.本研究以EGCG为干预物,观察其对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响,并通过检测肿瘤细胞凋亡情况以及MMP-2和VEGF蛋白表达水平,进一步探讨EGCG抑制肿瘤细胞增殖和侵袭转移的可能机制.方法 人肝癌HepG2细胞用含10％胎牛血清的高糖DME
【机 构】
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青岛大学医学院营养研究所,山东 青岛,266021 青岛大学医学院细胞与分子生物学实验室,山东 青
【出 处】
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2012第二届中韩植物化学物国际学术研讨会
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目的 表没食子儿茶素没食子酰胺(EGCG)是2-连苯酚基苯并吡喃与没食子酸形成的酯,是绿茶茶多酚的主要活性成分,具有抗氧化、抑瘤、抗突变等多种生物学活性.本研究以EGCG为干预物,观察其对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响,并通过检测肿瘤细胞凋亡情况以及MMP-2和VEGF蛋白表达水平,进一步探讨EGCG抑制肿瘤细胞增殖和侵袭转移的可能机制.方法 人肝癌HepG2细胞用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基培养,收集指数生长期细胞进行实验.实验设空白组、对照组和实验组,实验组加入EGCG药物终浓度分别为20、40、60、80、100、120、150 mg.L-1的培养液,分别培养24和48h后采用CCK-8法检测不同浓度EGCG对肝癌HepG2细胞增殖的影响,并在倒置显微镜下观察细胞生长状态的变化：计算出EGCG对肝癌HepG2细胞作用的IC25和IC50剂量.以IC25和IC50剂量作用于肝癌HepG2细胞,以荧光显微镜下Annexin V-FITC/PI双染法检测不同剂量EGCG对肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用：Transwell侵袭实验观察EGCG对肝癌HepG2细胞侵袭力的影响：ELISA法检测HepG2细胞中MMP-2和VEGF表达水平.结果EGCG药物溶液作用24和48h后,各实验组细胞的生长增殖均明显受到抑制,细胞形态结构发生改变,细胞数量减少,边缘不光滑,胞质和胞核皱缩,胞质内出现黑色颗粒物质：且随着药物浓度和作用时间的增加,肿瘤细胞受损状况也逐渐加重,对细胞增殖的抑制作用也越明显,呈量效和时效依赖性,差异具有显著性(P＜0.05).其24、48h IC25值分别为58.19和54.19 mg.L-1,IC50值分别为133.90和78.97 rmg.L-1.IC25和IC50剂量EGCG作用24h后,细胞生长状态显著下降,可明显诱导细胞凋亡；随着药物浓度的增加,凋亡细胞数量增加,中晚期凋亡细胞逐渐增多,细胞凋亡程度进一步加重.侵袭实验结果显示,IC25和IC50剂量EGCG组HepG2细胞穿膜数分别为(28.33±7.66)及0个,与对照组(92.5+16.31)个比较,穿膜数量明显减少,差异均具有显著性(P＜0.05),其侵袭抑制率分别为69.47％和100％.IC25和IC5o剂量EGCG作用24h后,肝癌HepG2细胞上清液中MMP-2和VEGF蛋白表达水平显著下降,与对照组及两组间比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05),可明显下调HepG2细胞MMP-2表达水平.结论 EGCG列人矸癌HepG2细胞具有抑制增殖和侵袭作用,其机制可能与EGCG诱导HepG2细胞凋亡和下调MMP-2及VEGF蛋白表达水平,进而抑制细胞外基质降解和新生血管形成有关.
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