杂交猪γ-干扰素全基因克隆及原核表达

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wsw361
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RT-PCR扩增技术,从经ConA活化的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA中扩增出IFN-γ cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中进行测序验证后,与原核表达载体pET30a(+)重组,构建含IFN-γ基因的重组表达质粒pET30a(+)/IFN-γ,测序结果与NCBI中已登录的IFN-γ基因序列比对,核苷酸序列同源性在98.6%~100%之间,氨基酸同源性在96.4%-99.4%;诱导表达含Hisx6的IFN-γ重组蛋白,经sDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白进行成功表达,相对分子量约26Ku,表达量约为33%,主要存于包涵体中,具有良好的免疫学活性,本研究的进行为猪源γ-干扰素深入研究奠定基础。
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