【摘 要】
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帕金森病是人类第二大神经退行性疾病,严重影响着人们的生活.目前,没有行之有效的方法 可以治疗帕金森病.因此,本实验探讨口服鹿茸提取物对单侧双位点注射6-OHDA 诱导的帕金森动物模型的治疗作用及其发挥该作用的物质基础.采用超微粉碎法水提鹿茸获得鹿茸提取物(PAEs).Bradford 法检测鹿茸提取物中蛋白含量,SDS-PAGE 电泳确定蛋白分子量和LC-MS-MS 鉴定PAEs及其吸收入血后的蛋
【机 构】
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中国中医科学院 西苑医院,北京 100700;中国中医科学院 北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室,医学实验中心,北京 100700
【出 处】
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2017年中国药学大会暨第十七届中国药师周
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帕金森病是人类第二大神经退行性疾病,严重影响着人们的生活.目前,没有行之有效的方法 可以治疗帕金森病.因此,本实验探讨口服鹿茸提取物对单侧双位点注射6-OHDA 诱导的帕金森动物模型的治疗作用及其发挥该作用的物质基础.采用超微粉碎法水提鹿茸获得鹿茸提取物(PAEs).Bradford 法检测鹿茸提取物中蛋白含量,SDS-PAGE 电泳确定蛋白分子量和LC-MS-MS 鉴定PAEs及其吸收入血后的蛋白组分.将诱导成功的Wistar 大鼠分为正常组、模型组、PAEs高、低剂量组和美多芭阳性对照药组,每组5 只.HPLC-MS 检测脑组织和脑脊液中单胺类物质的含量变化；HPLC-FLD 检测脑组织和脑脊液中氨基酸的含量变化；HE 染色观察黑质区神经元细胞数量及形态；免疫组化观察TH 免疫反应阳性神经元数目；Western blot 检测黑质和纹状体内GAP-43 和NF-H 蛋白表达.结果 表明：①超微粉碎法所得鹿茸蛋白浓度为36.69％；SDS-PAGE 显示,鹿茸蛋白分子量广泛分布在10kDa-250kDa,且多集中在25-70 kDa 之间；质谱鉴定鹿茸蛋白组分,得到了157 种蛋白质成分,其中与神经系统生长和再生过程相关的蛋白有16 个.②对脑组织和脑脊液中单胺含量检测表明,给予6-OHDA 后脑脊液中多巴胺(DA)和5-羟色胺类(5-HT)递质含量降低但无统计学差异；与正常组比较,给予大鼠6-OHDA 定点注射后,纹状体中的DA 及其代谢产物DOPAC 含量均显著下降(P＜0.01)；DOPAC/DA 和HAV/DA 水平均有显著的升高(P＜0.05,P＜0.01)； 5-HT 含量明显降低,5-HIAA/5-HT 显著升高(P＜0.01).给予PAEs后DA,5-HT 含量及其代谢产物有不同程度改善.③氨基酸含量检测表明定点注射6-OHDA 后脑脊液与纹状体中谷氨酸含量显著升高,表明PD 模型以兴奋性为主；给予PAEs 后可降低谷氨酸含量,并缓解其兴奋性.④HE 染色和免疫组织化学结果 表明在6-OHDA 诱导损伤的大鼠帕金森病模型,6-OHDA 可使黑质纹状体内神经元细胞数量明显减少且形态改变,而PAEs 可改善这一状况.⑤Western blot 结果 显示,PAEs 和美多芭均使GAP-43 和NF-H 蛋白表达水平上调,且PAEs 给药组优于美多芭给药组.⑥最后将正常血清进行大鼠蛋白搜库,给予PAEs 后的血清进行偶蹄目蛋白搜库,结果 显示共得到差异蛋白99 个,将得到的差异蛋白与提取的总蛋白进行比对共得到37 个蛋白来源于PAEs.其中PEDF 作为一种神经营养蛋白,具有促进神经元分化抑制血管生成的作用,其在血液中存在也能很好的解释为什么鹿茸蛋白提取物口服后仍具有治疗PD 疾病,促进神经元再生修复的作用.综上所述,PAEs 可能通过促进轴突再生和突触重塑,进而修补受损的多巴胺转运通路以达到对PD 的治疗作用,为口服PAEs 治疗帕金森病的机制研究提供依据.
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