【摘 要】
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目的 研究电离辐射对卵巢癌耐药株细胞SKVCR自噬性细胞死亡的影响并探讨其机制.方法 采用集落形成实验和CCK8试剂盒检测细胞长期和短期生存率情况,用流式细胞术检测了细
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院 卫生部放射生物学重点实验室,吉林 长春 130021
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目的 研究电离辐射对卵巢癌耐药株细胞SKVCR自噬性细胞死亡的影响并探讨其机制.方法 采用集落形成实验和CCK8试剂盒检测细胞长期和短期生存率情况,用流式细胞术检测了细胞凋亡率,MDC染色及GFP-LC3转染细胞,WESTERN BLOT方法以及实时荧光定量PCR方法检测自噬发生的情况.结果 实验分为假照组,超分割组(1Gy/次,2次/1天,连续5天),常规分割组(2Gy/次,1次/1天,连续5天), 10Gy单次照射组.处理后24小时,SKVCR自噬发生率分别为6%,22%,16%,25%.CCK8结果显示,10Gy照射后,细胞存活率明显降低,照射前加入3MA(自噬特异性抑制剂),Z-VAD-FMK(凋亡抑制剂)使细胞存活率进一步下降.实时荧光定量PCR结果显示照射后MAPLC3B、 TP531NPI、bax、TIGAR、DRAM表达升高,AKT,bcl-2,mTOR, p-mTOR表达下降.WESTERN BLOT结果显示蛋白表达与基因水平变化相一致.结论 电离辐射可诱导卵巢癌耐药细胞发生自噬,其机制涉及PI3K1/AKT、mTOR、PI3K Ⅲ/Beclin和P53/DRAM(TIGAR)等自噬调控的信号通路.
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