【摘 要】
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高碘酸-无色品红染色方法（PAS）作为一种特殊染色技术,广泛应用于人体和动物组织的诊断和研究,可以清楚显示糖原、中性粘多糖、肾小球基底膜系膜基质等物质,为临床诊断、分类和治疗提供了重要依据。PAS染色受诸多因素的影响,染色结果不易掌握。经过反复实验,对影响PAS染色效果的因素加以总结分析,并进行了一定的改进,染色结果较为满意。材料来源于我院活检标本,肺活检、肾穿刺、肝组织标本等。染液配制:1、氧化
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高碘酸-无色品红染色方法（PAS）作为一种特殊染色技术,广泛应用于人体和动物组织的诊断和研究,可以清楚显示糖原、中性粘多糖、肾小球基底膜系膜基质等物质,为临床诊断、分类和治疗提供了重要依据。PAS染色受诸多因素的影响,染色结果不易掌握。经过反复实验,对影响PAS染色效果的因素加以总结分析,并进行了一定的改进,染色结果较为满意。材料来源于我院活检标本,肺活检、肾穿刺、肝组织标本等。染液配制:1、氧化液:1%高碘酸钠。2、Schiff液:200ml蒸馏水煮沸1min后加入1g碱性品红继续煮沸1min,摇匀至彻底溶解,冷却至50℃加入1NHCL20ml,降至室温25℃加入偏重亚硫酸钠1.5g摇匀,放置暗处过夜,呈淡草黄色,加入活性炭1.5g,静置2小时过滤后置冰箱待用。方法:1、组织经中性福尔马林固定,石蜡切片厚3微米脱蜡至水。2、1%过碘酸钠氧化15min,蒸馏水洗2min×3。3、Schiff液40℃20min,流水冲洗。4、Marry苏木素染细胞核30s,流水冲洗。5、梯度酒精脱水,二甲苯透明,封片。结果;糖原及其他PAS反应阳性物质呈红色,细胞核呈蓝色。PAS染色又称糖原染色,实验把经典的过碘酸改成过碘酸钠,过碘酸钠可把多糖的葡萄糖分子的两个相邻的带有羟基的-c-c键打开,生成醛基再与染色剂结合。Schiff液中的碱性品红经过亚硫酸钠和二氧化硫的作用,醌式结构被破坏,成为无色品红,经过氧化后的醛基和无色品红液进行结合成红色。注意事项:1、取材时应取小块组织固定,固定不均匀可出现糖原趋于一端的情况。固定糖原应用95%酒精、carnoy液等,但在实际工作中,甲醛固定的组织块也能得到良好的效果。组织切片厚度在3微米,切片太厚或太薄不利于观察细胞内空泡结构。2、配制试剂的容器,药勺,必须洁净。偏重亚硫酸钠打开应带有硫的气味。高碘酸钠氧化时间也对实验结果也有影响,时间过长可引起非特异性染色,室温过高会发生非特异性反应。因此,室温高时应适当缩短时间。配制好的Schiff液存放于棕色瓶中0-4℃避光保存。使用前先放置室温复温后使用。PAS染色在病理诊断中的应用:1、真菌病的诊断,虽然在HE染色中有时可显示出来,但其结构多不清楚。其他一些染色方法也能显示真菌,如革兰氏染色,硝酸银染色,但都不如PAS对真菌特异性强,着色鲜艳。PAS染色后,真菌和组织的结构清晰可辨。因此,PAS特殊染色对于真菌的诊断有重要意义。2、PAS染色还可显示糖原,中性粘液物质,肾小球基底膜等。PAS染色可将组织中的粘多糖类物质染成樱桃红色,从而判断肿瘤细胞是否分泌糖原,肿瘤细胞的起源及肿瘤细胞是否发生血管浸润。3、PAS染色可使支气管的杯状细胞着色,染色时温度低于37℃.4、PAS染色鉴别细胞内的空泡变性,证明石蜡切片HE染色中所出现的细胞浆内空泡是糖原被水溶性固定剂溶解,还是脂肪被脂溶剂溶解5、在心肌病变和心血管疾病方面,可以观察缺血缺氧心肌坏死或梗死区的糖原减少。6、肿瘤组织的肝细胞癌,横纹肌、平滑肌、软骨肉瘤、汗腺瘤和化学感受器均有糖原存在。总之,PAS染色应用广泛,应注意固定液的选择、高碘酸钠的使用浓度、Schiff液的质量、染色时间等,使PAS染色达到理想的效果。
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