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目的:采用BALB/c 3T3细胞和L929细胞体外培养方法研究国家药品评价性抽验抗生素品种头孢噻吩钠和注射用氯唑西林钠中发现的杂质的细胞毒性。方法:选取BALB/c 3T3细胞株,将头孢噻吩钠及其3种杂质（其中杂质A和杂质B为现有标准中控制含量的杂质,3-位异构体杂质为本所提取）,分别与BALB/c 3T3细胞孵育48 h（终浓度范围为14.131000μg/ml）,进行中性红摄取实验后计算细胞存活率,采用GraphPad Prism软件计算IC50值;采用L929细胞株和BALB/c 3T3细胞株,将3个厂家生产的注射用氯唑西林钠以及本所提取得到的2个杂质（杂质1和杂质2均为未知杂质,且现有标准中未控制含量）,分别与L929细胞和BALB/c 3T3细胞孵育24 h、48 h、72 h（终浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125 mg/ml）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTTAssay）测得不同时间点各供试品的细胞存活率,用Bliss法推算出各时间点的半数抑制浓度IC50。结果:在BALB/c 3T3细胞中性红摄取细胞毒性试验体系中,杂质B、3-位异构体杂质、头孢噻吩钠以及杂质A的IC50值分别为101.0μg/ml,118.6μg/ml,121.4μg/ml,778.4μg/ml。结果可见杂质B的细胞毒性最大,而杂质A的细胞毒性最小。L929细胞MTT试验体系中,各孵育时间点3批注射用氯唑西林钠的细胞毒性略有差异,IC50最大可达2.8 mg/ml;2批杂质在各孵育时间点的细胞毒性均明显小于3批制剂(IC50值均大于2.9 mg/ml)。BALB/c 3T3细胞MTT试验体系中,各孵育时间点3个厂家生产的注射用氯唑西林钠的细胞毒性基本一致,IC50均在2.0mg/ml左右;2批杂质在各孵育时间点的细胞毒性均明显小于3批制剂(IC50值均大于3.7 mg/ml)。结论:头孢噻吩钠及其杂质对BALB/c 3T3细胞的毒性,由大至小分别为杂质B>3-位异构体杂质>头孢噻吩钠>杂质A。不同厂家生产的3批注射用氯唑西林钠细胞毒性较为接近;杂质1与杂质2的细胞毒性均弱于注射用氯唑西林钠;虽然现有标准中未控制杂质1、杂质2的含量,但二者在注射用氯唑西林钠制剂中的含量分别小于0.1%和0.5%,故推断上述2个杂质对注射用氯唑西林钠的体外毒性基本没有影响。综上所述,体外细胞毒性试验可以为提高国家评价性抽验样品的质量标准提供有价值的参考。