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目的：建立同时测定独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量的反相高效液相色谱法。方法：Shiseido C18 MG(250mm×4.6mm，5 μm)色谱柱，流动相乙腈一水(49：51)，检测波长330 nm，流速1.0mL·min-1，柱温30℃。结果：蛇床子素在0.0082～0.656 mg·mL-1内呈良好线性，r=1，平均同收率99.6％(RSD=1.9％);二氢欧山芹醇当归酸酯在0.0036～1.536 mg·mL-1内呈良好线性，r=0.9999，平均回收率99.4％(RSD=2.0％)。结论：通过对22批不同来源独活药材与饮片的含量测定，证明方法简单，准确可靠，重复性好。在重庆巫山地区以海拔1600～1700 m、向阳、黑土的生长条件下，独活中蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量均较高。