肠出血性大肠杆菌O157:H7遗传标志性基因定量PCR的建立及在鲜奶检测中的应用

来源 :江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nanguo345
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  肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7 是一种人兽共患病原菌,奶牛和奶制品是病原菌重要的传播媒介和介质.本文旨在建立以遗传标志性Z0372 为靶标的Taqman 荧光定量PCR 检测技术,特异性检测鲜奶中EHEC O157:H7.根据EHEC O157:H7 独有基因Z0372 为靶序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有Z0372 基因的重组质粒作为标准品进行Taqman 荧光定量PCR 反应,分析方法敏感性、特异性,并检测临床鲜奶样品以验证Taqman 荧光定量 PCR 实用性和可靠性.
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目前仍广泛使用的鸡传染性支气管炎H120 弱毒疫苗株对我国的IBV 主要流行株不能提供完全保护,针对新的流行情况研制有效疫苗迫在眉睫.本课题组前期已建立了H120 疫苗株的反向遗传操作系统,在此基础上,以我国目前主要流行IBV 毒株的S 基因替换H120 疫苗株的S 基因,通过反向遗传操作技术拯救嵌合病毒;通过系统评价嵌合病毒的生物学特性,为研制针对我国IBV 主要流行株的新型活疫苗奠定基础.研究
2011 年9 月,泰州某猪场暴发疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征传染性疾病.采集发病猪腹股沟淋巴结、脾脏和肺脏组织,研磨成组织混悬液,经PCR 检测,阳性产物测序,阳性病料悬液经0.22μm 滤膜过滤后接种PK15 细胞,连续盲传5 代后收取细胞病毒液并提取DNA,PCR 检测及间接免疫荧光鉴定,结果表明,该分离株为猪圆环病毒2 型(PCV2),命名为TAIZ110926 株,目标序列提交给NCBI
鸡组织样品中二甲氧苄啶和甲氧苄啶残留经乙腈和丙酮提取,正己烷去脂肪,MCX 固相萃取小柱净化.二甲氧苄啶和甲氧苄啶残留采用高效液相色谱紫外检测器检测,流动相为乙腈/0.01mol/L 磷酸二氢钾水溶液(13/87,v/v),紫外检测波长为270nm,外标法定量.
建立了鸡肉中8 种氟喹诺酮类药物和金刚烷胺的超高效液相色谱串联质谱的测定方法。鸡肉样品经QuEChERS 萃取剂提取,QuEChERS 净化剂净化后,经氮气流吹干浓缩后,以超高效液相色谱串联质谱测定,稳定同位素内标法定量。
肠出血性大肠杆菌(EnterohaemorrhagicEscherichia coli,EHEC)是重要的人兽共患病原菌,O157:H7 是EHEC 重要的致病血清型,能够在世界范围内引起动物、家禽和人类感染,导致严重的公共卫生问题.
会议
引言副流感病毒3型属副黏病毒科呼吸道病毒属,是人和动物呼吸道重要病原.其中牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是引起牛呼吸道疾病的主要病原,危害巨大[1,2].2013年底本实验室首次从江苏、安徽多地患呼吸道疾病的山羊中分离鉴定出山羊PIV3,成为该病毒属的新成员[3].HN、F、M、N是病毒的主要结构蛋白,其中糖蛋白HN具有血凝素和神
会议
猪链球菌(SS)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、和副猪嗜血杆菌(HPS)是猪呼吸道常见的重要病原,引起的临床症状很难区分.多重感染也给传统的细菌学诊断方法带来困难,所以有必要建立一种快速鉴别这三种细菌的多重PCR 方法.本研究根据三种细菌全基因序列设计了3 对种属引物,通过PCR 体系以及PCR 程序的优化,最终确定了三重PCR 反应体系,可以直接从临床病料中快速检测到这三种病原菌.
会议
鸽副粘病毒1 型(PPMV-1)是一种能够特异性的感染宿主鸽子的病原体,通常被认为是禽副粘病毒1 型(APMV-1)在鸽子上的适应性变种。有研究报道PPMV-1 的这种适应性变化与病毒基因及蛋白的变化有关[1],但是到目前为止,这种变化与病毒的生物学特性的关系仍未见报道。
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鸡盲肠肝炎是由组织滴虫引起的一种传染性原虫病,以损害肝脏与盲肠为主要特征。该病主要侵害幼年火鸡,其次是幼鸡和后备鸡,特别是在饲养管理条件不良的情况下,发病严重,死亡率高,给养鸡业造成很大的经济损失。本实验采集了来兽医院就诊的病鸡,对其进行剖检发现肝脏肿大呈紫褐色,表面散在大小不等纽扣状坏死灶,盲肠明显肿大。