【摘 要】
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脂肪酶是一种重要的工业酶类,应用于油脂水解、食品风味和香味的改进、医疗医药等优质化工及化学品合成工业中.本文利用廉价的纯粘胶无纺布作为脂肪酶固定化的载体,研究了以油酸和无水乙醇为底物生物柴油酯化合成的反应条件并考察织物整理剂的加入对固定化的影响.粘胶是人造纤维中再生纤维素纤维的主要品种,具很强的吸附性能.以100g/m2的纯粘胶无纺布作为固定化载体,在2.82g油酸,等摩尔乙醇,0.5g分子筛,0
【机 构】
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北京化工大学生命科学与技术学院,北京生物过程重点实验室,北京,100029
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脂肪酶是一种重要的工业酶类,应用于油脂水解、食品风味和香味的改进、医疗医药等优质化工及化学品合成工业中.本文利用廉价的纯粘胶无纺布作为脂肪酶固定化的载体,研究了以油酸和无水乙醇为底物生物柴油酯化合成的反应条件并考察织物整理剂的加入对固定化的影响.粘胶是人造纤维中再生纤维素纤维的主要品种,具很强的吸附性能.以100g/m2的纯粘胶无纺布作为固定化载体,在2.82g油酸,等摩尔乙醇,0.5g分子筛,0.13g酶布(3cm×3cm大小),30℃,190rpm的反应条件下,单批次油酸的转化率可达93.5％.载体吸附混合整理剂(聚氨酯胶R)的酶液,最优反应条件下固定化酶催化单批反应,24h内转化进程中整体转化率提高5％左右，蛋白负载量提高15％.并且在等摩尔比无水乙醇分10次流加的条件下,经整理剂处理的固定化酶批次反应半衰期可以达到168h.该无纺布混合整理剂的脂肪酶固定化方法在油酸乙酯的酶催化酯化合成中具有很好的应用前景.
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本研究以大肠杆菌为宿主菌,对SAM合成酶基因进行克隆.应用PCR技术从E.coli BL21的总DNA中扩增出1.1kb的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,此基因用于表达融合蛋白,测序证明正确,将其连接到克隆载体PGEMT载体上,再将目的基因插入大肠杆菌高表达载体PET28a中,经双酶切鉴定其连接成功,表明重组子构建成功,为后续高效表达SAM合成酶奠定了坚实基础.
本文利用PCR方法从表皮葡萄球菌基因组DNA中扩增到两条D-乳酸脱氢酶基因(SE2074，SE2121),并连接到载体pET-15b上,构建表达质粒pET-15b-SE2074和pET-15b-SE2121.将重组质粒分别转入大肠杆菌Rosseta(DE3)中,重组菌株经IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳分析表明两条D-乳酸脱氢酶基因在大肠杆菌中实现了表达,表达产物的分子量均约为37 kDa.
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