【摘 要】
：
为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time PCR,来建立定量检测TTSuV1核酸的标准曲线与直线回归方程。结果显示,该方法的线性关系良好,相关系数达0.999以上;最低可检测到至少6.3×101拷贝/μL的核酸模板;重复
【机 构】
：
北京农学院 动物科学技术学院,北京,102206
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会
论文部分内容阅读
为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time PCR,来建立定量检测TTSuV1核酸的标准曲线与直线回归方程。结果显示,该方法的线性关系良好,相关系数达0.999以上;最低可检测到至少6.3×101拷贝/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2％;对TTSuV2、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等常见猪源病毒均检测不到荧光信号;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于TTSuV1的检测与定量分析。
其他文献
为了建立特异性牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。本研究用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9).选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA板,用HRP标记的单克隆抗体2F4作为夹心抗体,建立了检测BV
目的：通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。方法：将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG–/TK–/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒B
牛轮状病毒(BRV)引起的腹泻在新生犊牛最为常见。在病原流行病学调查的基础上进行多价疫苗的研制，是预防和控制犊牛RV腹泻的关键。本文对国内外BRV病原学以及防控措施的研究进行总结，旨在为我国犊牛RV腹泻综合防控措施的建立提供理论和实验依据。指出，怀孕牛产前1～2个月一次接种BRV基因重配二价减毒疫苗，犊牛出生后及时足量地饲喂初乳，可有效预防犊牛的BRV腹泻。
为检测抗粘病毒基因(Myxovirus-resistant,Mx)的抗口蹄疫病毒功能,本研究构建了pEGFP-N1-Mx1真核表达载体,与对照质粒pEGFP-N1转染BHK21细胞,经G418筛选和Western Blot检测,获得BHK21-Mx1细胞系和BHK21-N1对照细胞系,利用免疫荧光技术进行Mx1细胞定位和BHK21-Mx1、BHK21-N1的FMDV感染实验。结果表明,成功克隆了牛
本实验旨在构建A.margihale MSP1α和MSP1β蛋白的原核表达质粒，在大肠埃希菌中表达重组MSP1α和MSP1β蛋白，并对其特性进行初步研究，为进一步探索A.margihale对红细胞致病的分子机制及亚单位疫苗的研制奠定基础。本实验阐明了A.margihale中MSP1α和MSP1β重组蛋白可在大肠埃希菌外膜上获得有效表达，并确认了MSP1α和MSP1β蛋白在侵入红血球过程中起到黏附素
目的：为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门氏菌诱导山羊免疫应答效果。方法：本研究将60只黑山羊随机分为3组即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门氏菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7d、15d、30d和45d的山羊消化道SIgA含量中,重组细
为分析2012年河南省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的特异性引物,利用RT-PCR方法,对2012年分离的5株PEDV毒株的S1基因进行扩增、克隆和序列测定,并对其进行遗传进化分析。结果表明:5株PEDV S1基因核苷酸同源性为98.3％～99.5％,氨基酸同源性为97.1％～98.9％。与2012年国内登陆的PEDV流行株相比较核苷酸同源性为97.8％
A cDNA clone of a genotype 4 swine hepatitis E virus (HEV) strain (SAAS-FX17),identified in Shanghai,has been constructed.Capped RNA transcripts were prepared in vitro and shown to be replication-comp
为进一步摸清泰州地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)的感染情况及危害程度,控制该病在泰州地区的流行,应用PCR方法对泰州所辖6个市区近两年116份病料进行PCV2的病原学检测。结果总阳性率为53.45％,每个地区都存在一定程度的感染。其中规模化养猪场阳性率为48.33％,散养户阳性率为58.93％。可见,PCV2在泰州地区猪群中普遍存在,应引起注意。
本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示).将SBC插入pMD19-T载体构建了19T-SBC,再用EcoRⅠ/HindⅢ酶切SBC亚克隆至pET-32a(+)构建了重组质粒pET-32a-SBC.将pET-32a-SBC转入