【摘 要】
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微生物发酵过程中面临严重的酸胁迫,提高微生物细胞的酸胁迫耐受性对于其在发酵生产中的应用有着重要的意义.本研究筛选出一种具有显著抗酸效果的新型抗酸胁迫元器件RecT蛋白,并考察了其在不同微生物种群间的作用效果.首先利用NICE表达系统,在L.lactis N29000中过量表达了来源于Escherichia coli MG1655和L.lactis A76的DNA同源重组蛋白RecT,构建重组菌株L
【机 构】
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江南大学生物工程学院 江苏无锡 214122;江南大学工业生物技术教育部重点实验室 江苏无锡 214122
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛
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微生物发酵过程中面临严重的酸胁迫,提高微生物细胞的酸胁迫耐受性对于其在发酵生产中的应用有着重要的意义.本研究筛选出一种具有显著抗酸效果的新型抗酸胁迫元器件RecT蛋白,并考察了其在不同微生物种群间的作用效果.首先利用NICE表达系统,在L.lactis N29000中过量表达了来源于Escherichia coli MG1655和L.lactis A76的DNA同源重组蛋白RecT,构建重组菌株L.lactis N29000(pN28148/RecT-MG1655)和L.lactis N29000(pN28148/RecT-A76).进而考察了RecT蛋白对L.lactis N29000酸胁迫抗性的影响.结果表明,pH 4.0胁迫培养3h后,重组菌株L.lactis N29000(pN28148/RecT-A76)和L.lacti.s N29000(pN28148/RecT-MG1655)的存活率分别是对照菌株的10.5和1.4倍.同时研究发现重组菌株可提高对乙醇胁迫的耐受性,20％(v/v)乙醇胁迫6h后,重组菌株L.lactisN29000(pN28148/RecT-A76)和L.lactis N29000(pN28148/RecT-MG1655)的存活率分别是对照菌株的3.7和2.1倍.在此基础上,在E.coli BL21中以pET28a为骨架质粒利用rpsT启动子异源表达来源于E.mol/Lcoli Mgmol/L1655的DNA同源重组蛋白RecT可显著提高菌株的酸胁迫抗性.研究发现,pH 3.8胁迫培养1 h后,重组菌株E.coli BL21(pET28a/RecT-MG1655)的存活率是对照菌株的9.4倍.本论文发现了一种新型的抗酸胁迫元器件并研究了其在保护细胞抵御酸胁迫过程中的重要作用,为乳酸菌抗酸胁迫生理功能的强化奠定了坚实的理论基础.
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