[目的]小菜蛾Plutella ylostella (Linnaeus)是一种世界性范围内广泛分布的十字花科蔬菜重要害虫.Bt毒素的作用机理是与昆虫中肠上的刷状缘膜蛋白受体结合,形成寡聚化的结构,在中肠细胞膜上形成穿孔,导致昆虫死亡,Polycalin蛋白是报道的可与Bt毒素结合的新受体.[方法]本研究以对Bt毒素敏感的小菜蛾为研究对象,对其中肠Polycalin蛋白基因进行克隆.分析了该基因在小菜蛾不同发育时期,幼虫不同部位的表达量.测定了Bt Cry1Ac毒素蛋白对小菜蛾的毒力,比较了小菜蛾取食不同浓度Cry1Ac毒素后Polycalin基因的表达量.制备Polycalin蛋白抗体,提取小菜蛾中肠受体BBMV蛋白,检测了Polycalin蛋白在小菜蛾中肠上的存在及其与Cry1Ac的结合特性.[结果]1、获得了小菜蛾Polycalin基因的全长序列为9102bp,预测蛋白的等电点和分子量分别为4.39和326.38 kDa,该基因与已报道的其他昆虫的氨基酸序列比对,同源性为35.9％-50.5％.2、发现Polycalin基因在小菜蛾各个发育阶段均可以表达,幼虫期表达量远高于蛹期和成虫期,其中以3龄幼虫表达量最高,成虫期表达量最低.同时比较了小菜蛾幼虫头部、胸部和腹部Polycalin基因表达情况,结果表明Polycalin在腹部表达量最高,头部和胸部表达量较低.3、发现小菜蛾3龄幼虫取食活化的不同浓度Bt Cry1Ac毒素蛋白后,Polycalin基因的表达量下降,但随着取食时间的延长,小菜蛾Polycalin的表达量逐渐恢复.4、用Western blot技术检测到中肠BBMV蛋白中有一个约300kDa的条带可以与Polycalin蛋白抗体结合,说明中肠上确实存在Polycalin蛋白.5、通过Ligand blot方法,运用Bt Cry1Ac活化毒素及其抗体检测,发现Polycalin蛋白条带可以与Bt Cry1Ac活化毒素结合.[结论]小菜蛾中肠上确实存在Polycalin蛋白,而且该蛋白可以与Bt毒素结合,推测具有受体功能.