产Ⅱa类细菌素乳酸菌筛选、鉴定及群体感应相关基因分析

来源 :中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangzhuo2009ny
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  从实验室中挑选已分离纯化的1 0株乳酸菌,通过牛津杯法筛选出1株对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显抑制作用的乳酸菌菌株.排除有机酸、过氧化氢等干扰后,乳酸菌发酵离心上清液仍有抑菌活性,胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶处理后失去抑菌活性,从而确定产生抑菌物质具有蛋白质性质细菌素.通过革兰氏染色、16S rDNA基因同源性分析、比对并建立系统发育树综合鉴定.多数产Ⅱ类细菌素乳酸菌通过自诱导肽介导的群体感应(QS)系统调控其细菌素的合成,基于Ⅱa类乳酸菌细菌素具有N端保守序列YGNGVXCXXXXCXV,通过设计能够有效扩增Ⅱa类细菌素编码结构基因的特异性引物,对该菌株所编码的植物乳杆菌Ⅱa类细菌素合成的调控现象、机制、系统组分相关特异性基因进行PCR扩增,经测序、比对基因序列和生物信息分析软件数据分析.该菌株与已报道的Lactobacillus plantarumWCFS1含有相同的双组份调节系统.结果表明:该菌株为革兰氏阳性植物乳杆菌,将其命名为Lactobacillus plantarum L-4.发现L-4与Genebank数据库Ⅱa类细菌素编码基因具有很高的一致性,该菌株含Plantaricin A能诱导调节操纵子plnABCD的转录,此操纵子包括编码Plantaricin A前体的基因plnA;编码组氨酸激酶基因plnB;编码反应调节器基因plnC/plnD是由同一操纵子上基因编码的,plnC激活转录并产生细菌素,而plnD在细菌素的合成过程中起负调节作用;含有编码ABC转运蛋白和辅助蛋白的plnH基因;细菌素前提多肽plnE具有N末端α螺旋和一个C-末端α螺旋样结构;含有编码双甘氨酸引导序列的ABC转运系统基因plnG,作为ATP结合转运蛋白并结合物质跨膜运动Ⅱa类细菌素前提多肽plnJ、pinK分别含有55、57个氨基酸.细菌素免疫基因plnI是膜结合CAAX蛋白酶家族.通过部分特异基因的扩增,表明该菌株编码Ⅱ类细菌素的合成是外信息素肽信号间的转换.后续将通过共培养、促进或抑制剂对群体感应基因的表达量进行研究.
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