【摘 要】
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目的:构建金黄地鼠Apoa5基因表达载体以及在不同组织中的表达差异分析,为深入研究Apea5基因在金黄地鼠不同组织中功能奠定基础.
方法:提取金黄地鼠肝脏组织总RNA,采用RT-
【机 构】
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中国医科大学实验动物部110001
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目的:构建金黄地鼠Apoa5基因表达载体以及在不同组织中的表达差异分析,为深入研究Apea5基因在金黄地鼠不同组织中功能奠定基础.
方法:提取金黄地鼠肝脏组织总RNA,采用RT-PCR方法对金黄地鼠4poa5基因的cDNA进行克隆,构建Apoa5基因表达载体并将其转染293T细胞,分别采用RT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白质表达水平.采用荧光定量PCR检测并分析Apoa5mRNA在8个组织中的表达量.
结果:经PCR检测鉴定,Apoa5基因表达载体构建成功,经测序分析金黄地鼠4poa5基因cDNA全长1243bp,编码366个氨基酸,与人、大鼠、小鼠等物种比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性,金黄地鼠与人、大鼠、小鼠的氨基酸同源性分别为75％、84％、84％.;转染293T细胞48h后,RT-PCR和Western blot结果表明Apoa5基因在mRNA和蛋白质水平都有表达.荧光定量PCR结果显示,Apoa5mRNA在肝脏表达量最高,在脑和睾丸中中度表达,在心、脾脏、肺、肾、卵巢组织中低度表达.
结论:成功构建Apoa5基因表达载体并分析其在不同组织中的表达差异,为制备Apoa5转基因金黄地鼠动物模型以及研究Apoa5基因在金黄地鼠脂类代谢中的功能奠定基础.
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