【摘 要】
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对本实验室筛选的γ-氨基丁酸(GABA)高产菌株——短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306的谷氨酸脱羧酶基因(gad)进行了克隆和表达。经过对引物和PCR 扩增条件的选择和优化,从提取的Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306基因组中克隆得到了长度为1400bp的核酸片段。以pET-28a(+)为载体,对扩增片段和pET-28a(+
【机 构】
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浙江大学材料与化学工程学院,杭州 310027 浙江科技学院生物与化学工程学院,杭州 310023
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对本实验室筛选的γ-氨基丁酸(GABA)高产菌株——短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306的谷氨酸脱羧酶基因(gad)进行了克隆和表达。经过对引物和PCR 扩增条件的选择和优化,从提取的Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306基因组中克隆得到了长度为1400bp的核酸片段。以pET-28a(+)为载体,对扩增片段和pET-28a(+)进行了Bamh和EcoR Ⅰ双酶切及连接,经过优化酶切和连接条件,得到了pET-28a(+)-gad表达质粒。连接产物转化BL21(λDE3),经双酶切分析、PCR克隆和DNA测序,从卡那霉素抗性平板上的阳性转化子中得到了表达谷氨酸脱羧酶的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28-gad,所得谷氨酸脱羧酶基因与Lactobacillus brevis ATCC 367的gad有95％的同源性,且具有GAD的保守序列。
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