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本研究从牛血中提取总RNA,根据设计的特异引物,利用PCR技术扩增出SRY基因HMG box基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到E.coli Top10中,提取质粒并用Ec0R Ⅰ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPIC9K连接并转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9 K-sRYHMG box,经PCR、酶切、测序验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母进行真核表达SRY基因HMGbox蛋白打下基础。