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目的 筛选lncRNA UCA1相互作用的蛋白,揭示UCA1在膀胱癌发展中的功能机制.方法 体外转录获得地高辛标记的lncRNA-UCA1,通过反RNA Pull-down实验,结合质谱分析获得与UCA1相互作用的蛋白.采用RIP及RNA Pull-down实验验证筛选的与UCA1相互作用的蛋白.利用生物信息学对筛选出的蛋白进行分析,预测UCA1与其相互作用蛋白(keratin 10,K10)的结合结构域.分别构建UCA1与K10表达载体和干涉载体,将UCA1和K10表达载体单独或共同转染膀胱癌BLX-211、T24细胞,G418筛选稳定转染细胞株.同时,将UCA1和K10干涉载体单独或共同转染膀胱癌BLZ-211、5637细胞,并筛选稳定转染细胞株.Western-blot检测UCA1与K10相互作用对ERK1/2,P38和AKT及其磷酸化水平的改变.FCM检测UCA1与K10相互作用对细胞周期的影响,并采用划痕实验、克隆形成实验、Transwell小室实验检测两者相互作用对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用.结果 筛选得到10个与UCA1相互作用的蛋白,包括K10和PKM2等.生物信息学预测K10与UCA1有两个相互作用的结合结构域(K-F1,K-F2),采用RT-PCR获得了这两个结合结构域.RIP和RNA Pull-down实验结果表明K10与UCA1有相互作用,且相互作用的结合结构域为K-F1,而不是K-F2.转染K-F1在T24细胞中异位表达,建立UCA1与K-F1相互作用,发现促进了肿瘤的增殖、侵袭和迁移；相反,以K10-siRNA和UCA1-siRNA单独或共同转染BLZ-211和5637细胞,破坏UCA1与K10的相互作用,细胞的增殖能力和侵袭能力减弱.在T24细胞中,FCM结果显示,与对照组细胞周期43.5±2.37％相比,稳定转染K-F1组的细胞周期为71.3±2.84％,具有明显的统计学意义.Western-blot结果表明,T24细胞中,转染K-F1组与对照组比较,ERK1/2、P38及其磷酸化水平没有变化,AKT表达水平没有变化,但AKT的磷酸化水平明显增加；PI3K抑制剂处理T24细胞,K-F1与UCA1相互作用对AKT的磷酸化水平增加的影响消失.BLZ-211、5637细胞中,siRNA抑制UCA1或K10的表达,AKT的磷酸化水平减少,而ERK1/2、P38及其磷酸化水平没有变化.FCM结果表明,AKT的磷酸化水平T24细胞为38.2±3.12％,转染K-F1的T24细胞为79.7±4.01％；细胞周期抑制蛋白P21磷酸化水平T24细胞与转染K-F1 T24细胞分别是2.34±0.69％和58.7±3.89％,具有明显地统计学差异.结论 UCA1与K10相互作用促进了膀胱癌细胞的发展,其对膀胱癌细胞的生长能力的影响是通过增加细胞周期引起的,而不是减少细胞凋亡,功能机制是两者相互作用介导了AKT信号转导通路,促进了P21蛋白的磷酸化,增强了细胞周期.